醌氧化還原循環(huán)利用氫醌/醌類(lèi)化合物作為電子穿梭載體,驅(qū)動(dòng)Fenton反應(yīng),在木腐真菌胞外降解木質(zhì)纖維素過(guò)程中發(fā)揮重要作用。裂解性多糖單加氧酶（英文,LPMO）是最近發(fā)現(xiàn)的一類(lèi)新型銅依賴(lài)氧化酶,可在抗壞血酸、氫醌等外源電子供體驅(qū)動(dòng)下氧化糖苷鍵,并促進(jìn)多糖水解。LPMO氧化氫醌的過(guò)程中產(chǎn)生的半醌中間體已被證實(shí)可以還原Fe³⁺產(chǎn)生Fe²⁺和H₂O₂,從而驅(qū)動(dòng)Fenton反應(yīng)的發(fā)生并產(chǎn)生羥自由基。是否暗示著LPMO有可能參與醌氧化還原循環(huán)驅(qū)動(dòng)Fenton反應(yīng)呢?本論文首次將LPMO與醌氧化還原循環(huán)聯(lián)系起來(lái),在體外證實(shí)了LPMO可參與醌氧化還原循環(huán)驅(qū)動(dòng)Fenton反應(yīng)并產(chǎn)生羥自由基,進(jìn)一步系統(tǒng)地研究了葡萄糖脫氫酶（英文,GDH）和1,4-苯醌還原酶（英文,BQR）分別協(xié)同LPMO反應(yīng)過(guò)程中H₂O₂、鐵還原和羥自由基的產(chǎn)生規(guī)律。具體研究結(jié)果如下:經(jīng)異源表達(dá)及分離純化分別獲得了來(lái)源于Iprex lacteus CD2和Echinodontium taxodii 2538... 

【文章來(lái)源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：83 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 緒論
    1.1 裂解性多糖單加氧酶
        1.1.1 裂解性多糖單加氧酶的生物學(xué)功能
        1.1.2 裂解性多糖單加氧酶的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        1.1.3 裂解性多糖單加氧酶的催化機(jī)制
        1.1.4 裂解性多糖單加氧酶的電子供體
    1.2 醌氧化還原循環(huán)系統(tǒng)
        1.2.1 醌氧化還原循環(huán)的生物學(xué)功能與應(yīng)用
        1.2.2 醌氧化還原循環(huán)驅(qū)動(dòng)Fenton反應(yīng)的機(jī)制
        1.2.3 醌氧化還原循環(huán)中的酶促反應(yīng)
    1.3 論文研究?jī)?nèi)容
        1.3.1 目的與意義
        1.3.2 主要研究?jī)?nèi)容
        1.3.3 研究思路與技術(shù)路線(xiàn)
2 LPMO的異源表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌種
        2.1.2 培養(yǎng)基
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 引物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 LPMO的基因克隆與克隆載體的構(gòu)建
        2.2.2 LPMO在畢赤酵母中的異源表達(dá)與分離純化
        2.2.3 基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜
        2.2.4 LPMO協(xié)同纖維素酶水解纖維素的實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.5 LPMO小分子電子供體的鑒定方法
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 LPMO的基因克隆與異源表達(dá)
        2.3.2 LPMO氧化活性的驗(yàn)證
        2.3.3 LPMO促進(jìn)纖維素酶水解
        2.3.4 LPMO的小分子電子供體
    2.4 本章小結(jié)
3 LPMO協(xié)同GDH驅(qū)動(dòng)醌氧化還原循環(huán)
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 培養(yǎng)基
        3.1.3 主要試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 GDH的表達(dá)與純化
        3.2.2 GDH的酶活測(cè)定
        3.2.3 H_2O_2的測(cè)定方法
        3.2.4 鐵還原力的測(cè)定方法
        3.2.5 羥自由基的測(cè)定方法
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 GDH的表達(dá)與純化
        3.3.2 LPMO與 GDH協(xié)同產(chǎn)生H_2O_0
        3.3.3 LPMO與 GDH協(xié)同還原三價(jià)鐵
        3.3.4 LPMO與 GDH協(xié)同產(chǎn)生羥自由基
    3.4 本章小結(jié)
4 LPMO協(xié)同BQR驅(qū)動(dòng)醌氧化還原循環(huán)
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 菌種
        4.1.2 培養(yǎng)基
        4.1.3 主要試劑
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 BQR的表達(dá)及分離純化
        4.2.2 BQR的酶活測(cè)定
        4.2.3 H_2O_2的測(cè)定方法
        4.2.4 鐵還原力的測(cè)定方法
        4.2.5 羥自由基的測(cè)定方法
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 BQR的表達(dá)與純化
        4.3.2 LPMO與 BQR協(xié)同產(chǎn)生H_2O_2
        4.3.3 LPMO與 BQR協(xié)同還原三價(jià)鐵
        4.3.4 LPMO與 BQR協(xié)同產(chǎn)生羥自由基
    4.4 本章小結(jié)
5 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文



本文編號(hào)：3194707