過氧化氫酶催化過氧化氫分解形成水和氧,主要作用是保護(hù)細(xì)胞免受活性氧（ROS）的損傷,盡管其在工業(yè)上被廣泛使用,但因熱穩(wěn)定的不足限制了它的使用前景。本研究以Bacillus pumilus ML413來源的血紅素過氧化氫酶（Kat X2）為研究對(duì)象,采用定點(diǎn)突變技術(shù)提高其熱穩(wěn)定性及催化效率。利用Po PMu Si C algorithm軟件計(jì)算并預(yù)測(cè)了其潛在突變位點(diǎn)的折疊自由能,根據(jù)預(yù)測(cè)的結(jié)果,選擇了其中自由能最低的3個(gè)位點(diǎn)（K117V, K117I和K117M）進(jìn)行突變。結(jié)果發(fā)現(xiàn),對(duì)K117位點(diǎn)進(jìn)行突變,可以有效提高Kat X2的熱穩(wěn)定性,突變體K117V在60℃下半衰期比野生型Kat X2提高38 min,催化效率較突變前提高31.7%。根據(jù)結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn),該點(diǎn)突變并未改變Kat X2的二級(jí)結(jié)構(gòu)。突變體K117V具有良好的工業(yè)應(yīng)用潛力。 

【文章來源】：食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2020,39(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株，質(zhì)粒和材料
    1.2 定點(diǎn)突變及重組菌株的構(gòu)建
    1.3 培養(yǎng)條件
    1.4 過氧化氫酶的純化
    1.5 酶活測(cè)定
    1.6 過氧化氫酶酶學(xué)特性分析
        1.6.1 過氧化氫酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)
        1.6.2 p H及溫度對(duì)酶的影響
        1.6.3 金屬離子的影響
    1.7 結(jié)構(gòu)建模
2 結(jié)果與討論
    2.1 突變位點(diǎn)的選擇
    2.2 過氧化氫酶的過表達(dá)和純化
    2.3 過氧化氫酶突變體酶學(xué)特性分析
    2.4 溫度、pH和金屬離子對(duì)突變體的影響
3 結(jié)語


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于關(guān)鍵因素調(diào)控發(fā)酵生產(chǎn)過氧化氫酶[J]. 周麗萍,劉龍,李江華,堵國成,陳堅(jiān).  食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2013(11)
[2]耐熱過氧化氫酶基因工程菌的構(gòu)建及其發(fā)酵條件[J]. 段緒果,沈微,李艷麗,饒志明,唐雪明,方慧英,劉吉泉,諸葛健.  食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2006(02)



本文編號(hào)：3191719