鎳在地球中的含量僅次于硅、氧、鐵、鎂,位居第五位。隨著鎳在工業(yè)生產(chǎn)上和人類生活中的廣泛應用,環(huán)境中鎳污染已經(jīng)成為國內(nèi)外研究的熱點問題。盡管鎳在自然界中分布很廣,但在人體內(nèi)含量卻極微,過量的鎳會對生物體造成了嚴重的毒害作用。鎳在能量代謝和氮循環(huán)中起著重要作用,是生物體生長發(fā)育的必需元素。在原核生物中鎳離子作為多種酶的輔因子已經(jīng)有較為全面的研究,但在真核生物中鎳的代謝機制并不清晰,有待進一步解析。因此對于鎳的代謝研究,無論是從生命機理本身還是解決實際鎳的環(huán)境污染問題都具有重大意義。本課題以真核生物釀酒酵母細胞作為研究模型,利用分子生物學和遺傳學的方法研究鎳離子的代謝機制。通過高鎳培養(yǎng)產(chǎn)生自發(fā)突變菌株并進行全基因組測序,用生物信息學的方法分析篩選出與鎳代謝相關的基因,對其與鎳的相互作用機制進行闡明。突變體基因組測序表明MTM1基因敲除菌株（mtm1?）在高鎳條件下的生長顯著優(yōu)于野生型菌株,過量表達則表現(xiàn)出對鎳的敏感性。鎳處理測定結果表明MTM1基因敲除菌株內(nèi)鎳的含量與野生型相比無顯著差別,而敲除株線粒體的鎳含量則顯著低于野生型菌株水平。體內(nèi)實驗證明鎳離子能夠恢復含錳超氧化物歧化酶（SOD2）... 

【文章來源】：上海師范大學上海市

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 生物體內(nèi)金屬離子代謝研究進展
        1.1.1 金屬離子在生物體中的作用
        1.1.2 金屬離子在生物體中的代謝研究進展
        1.1.3 金屬離子與人類的關系
    1.2 鎳離子在生物體內(nèi)代謝研究進展和發(fā)展動態(tài)
        1.2.1 鎳金屬污染研究現(xiàn)狀
        1.2.2 鎳離子在生物體內(nèi)的功能
        1.2.3 鎳離子在生物體內(nèi)代謝研究進展
        1.2.4 鎳離子對生物體的毒性研究進展
    1.3 MTM1 基因的研究進展
        1.3.1 MTM1 基因功能的研究
        1.3.2 超氧化物歧化酶(SOD)的分類與功能
        1.3.3 MTM1 基因與SOD2 的關系
    1.4 本課題研究的目的與意義
第2章 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗試劑
        2.1.2 實驗儀器與設備
        2.1.3 實驗所用菌株
        2.1.4 實驗所用引物
        2.1.5 實驗所用質(zhì)粒
    2.2 實驗方法
        2.2.1 各種培養(yǎng)基的配置
        2.2.2 各種試劑的配置
        2.2.3 生長實驗
        2.2.4 基因克隆
        2.2.5 釀酒酵母細胞線粒體的提取
        2.2.6 釀酒酵母細胞中金屬離子含量的測定
        2.2.7 釀酒酵母細胞中體內(nèi)SOD2 酶活性的分析
        2.2.8 釀酒酵母細胞中體外SOD2 酶活性的分析
        2.2.9 qRT-PCR反應測m RNA表達水平
        2.2.10 測量β-半乳糖苷酶活性實驗(lacZ)
        2.2.11 蛋白印跡法分析(Western Blot)
        2.2.12 綠色熒光蛋白GFP標記法
        2.2.13 氧化壓力對細胞生長的影響
第3章 結果與討論
    3.1 篩選與鎳離子代謝相關的基因
    3.2 鎳離子吸收對mtm1Δ菌株的生長影響
    3.3 MTM1 基因過量表達對mtm1?菌株生長的影響
    3.4 不同培養(yǎng)基中mtm1?菌株對鎳離子的吸收
        3.4.1 不同培養(yǎng)基中鎳離子含量的測定
        3.4.2 不同培養(yǎng)基中mtm1?菌株對鎳離子的吸收
    3.5 鎳離子對mtm1?菌株中SOD2 酶活性的影響
    3.6 鎳離子對mtm1?菌株SOD2 m RNA表達水平的影響
    3.7 氧化壓力對mtm1?菌株的影響
    3.8 mtm1?菌株線粒體中鎳離子含量的測定
    3.9 鎳離子對釀酒酵母細胞內(nèi)MTM1 基因的影響
        3.9.1 鎳離子對Mtm1p表達水平的影響
        3.9.2 鎳離子對Mtm1p在細胞內(nèi)定位的影響
第4章 結論與展望
    4.1 結論
        4.1.1 釀酒酵母細胞中MTM1 基因?qū)︽囯x子代謝調(diào)節(jié)
        4.1.2 鎳離子對釀酒酵母細胞中MTM1 基因的影響
    4.2 未來展望
參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]生活環(huán)境對健康的影響[J]. 趙越.  科技風. 2015(16)
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本文編號：3186750