基于Golden20Gate載體構(gòu)建過程,對CRISPR/Cas9雙靶點敲除技術(shù)的載體構(gòu)建系統(tǒng)進行了優(yōu)化,建立了一種簡單快速高效且無PCR擴增的雙靶點CRISPR/Cas9載體構(gòu)建方法。在本方法中,只需將設(shè)計好的2個靶點DNA小片段和1個外源片段用T4DNA連接酶構(gòu)建到CRISPR/Cas9載體上即可。用本方法對10個已報道的水稻基因構(gòu)建了20個雙靶點CRISPR/Cas9載體,陽性率為100%,測序結(jié)果顯示無突變。該載體系統(tǒng)非常適合大批量CRISPR/Cas9載體的構(gòu)建,同時也為其他植物中構(gòu)建雙靶點CRISPR/Cas9載體提供借鑒。 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2020,39(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 雙靶點CRISPR/Cas9相關(guān)載體的構(gòu)建
    1.3 雙靶點CRISPR/Cas9載體構(gòu)建
    1.4 引物
2 結(jié)果與分析
    2.1 雙靶點CRISPR/Cas9相關(guān)載體的構(gòu)建
    2.2 雙靶點CRISPR/Cas9載體構(gòu)建流程
    2.3 高效連接體系的建立
    2.4 本研究構(gòu)建的載體系統(tǒng)的適用性檢測
    2.5 單靶點載體的適用性檢測
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]百脈根LjSERKs基因家族在根瘤共生中的功能鑒定[J]. 汪濤,馮勇,張忠明.  華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2018(02)
[2]CRISPR/Cas9在豆科植物毛根轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用及共生基因的編輯[J]. 譚茜,王龍祥,張先鵬,余海翔,張忠明.  華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2017(05)



本文編號：3178232