基因組經(jīng)常受到外界環(huán)境和細胞代謝產(chǎn)生的DNA損傷因子的攻擊,經(jīng)過估計每個細胞每天會產(chǎn)生104-105次DNA損傷。真核生物針對DNA雙鏈斷裂損傷（DSBs）進化出了兩種修復途徑:同源重組修復途徑（HR）和非同源末端連接途徑（NHEJ）。相比于NHEJ,HR更加精確,可以利用姐妹染色單體為模板來復制損傷的DNA序列,因此只發(fā)生在細胞周期的S/G2期。HR的第一步就是剪切DNA雙鏈斷裂末端,產(chǎn)生一段突出的3’單鏈DNA,以完成接下來由RAD51重組酶介導的鏈交換過程。SOSS1復合物作為單鏈DNA結(jié)合蛋白復合物,在HR過程中起著重要作用。SOSS1復合物包含三個蛋白組分:INTS3,SOSSC和hSSB1,其中INTS3作為支架蛋白同時和hSSB1和SOSSC互作。SOSS1復合物可以識別最短長度為35nt的單鏈DNA,而且SOSS1識別單鏈DNA的能力比單獨的hSSB1高30倍。從INTS3N/hSSB1/SOSSC結(jié)構(gòu)中更可以看出,三個組分中只有hSSB1能結(jié)合單鏈DNA,暗示INTS3的C端可能對識別長的單鏈DNA有著關(guān)鍵的作用。近來有研究報道INTS6作為Integrator復合物... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
縮寫匯總
1 引言
    1.1 DNA雙鏈斷裂損傷修復途徑
        1.1.1 C-NHEJ
        1.1.2 Alt-NHEJ
        1.1.3 SSA
        1.1.4 同源重組修復
    1.2 單鏈DNA結(jié)合蛋白
        1.2.1 OB folds結(jié)構(gòu)
        1.2.2 RPA復合物
        1.2.3 hSSB1
    1.3 Integrator復合物
        1.3.1 Integrator復合物在UsnRNA成熟中的作用
        1.3.2 Integrator復合物控制RNAPII的"pause-release"過程
        1.3.3 Integrator復合物介導eRNA轉(zhuǎn)錄
        1.3.4 Integrator復合物在DSB修復中的作用
    1.4 研究目的和意義
2 實驗材料和方法
    2.1 實驗材料
    2.2 實驗試劑與儀器
        2.2.1 分子克隆試劑與儀器
        2.2.2 蛋白表達純化試劑與儀器
        2.2.3 蛋白結(jié)晶試劑與儀器
        2.2.4 細胞實驗試劑及儀器
    2.3 數(shù)據(jù)處理軟件
    2.4 實驗方法
        2.4.1 分子克隆
        2.4.2 蛋白質(zhì)表達
        2.4.3 蛋白質(zhì)純化
        2.4.4 蛋白質(zhì)結(jié)晶
        2.4.5 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)解析
        2.4.6 生化實驗
        2.4.7 細胞實驗
3 實驗結(jié)果
    3.1 INTS3與INTS6表達與純化
        3.1.1 INTS6c表達純化
        3.1.2 INTS3(560-995)純化與限制性酶切
        3.1.3 INTS3cl/INTScs/INTS6c純化與結(jié)晶
        3.1.4 INTS3[560-915)/INTS6c純化與結(jié)晶
        3.1.5 INTS3 (560-915)/INTS6c純化與結(jié)晶
        3.1.6 INTS3(560-905)/(925-995)共表達純化與復合物結(jié)晶
    3.2 INTS3c /INTS6c結(jié)構(gòu)解析
    3.3 INTS3c/INTS6c復合物結(jié)構(gòu)
        3.3.1 INTS3c/INTS6c整體結(jié)構(gòu)
        3.3.2 INTS3c二聚體結(jié)合界面
        3.3.3 INTS3c/INTS6c結(jié)合界面
    3.4 INTS3/INTS6影響同源重組修復過程
        3.4.1 INTS3/INTS6突變體互作實驗
        3.4.2 INTS3影響INTS6核定位
        3.4.3 INTS3/INTS6影響RAD51 foci形成
        3.4.4 INTS3/INTS6影響細胞存活
    3.5 INTS3二聚體幫助hSSB1識別長鏈ssDNA
        3.5.1 INTS3/hSSB1復合物表達純化
        3.5.2 INTS3/hSSB1與dT12和dT48凝膠遷移電泳實驗
        3.5.3 INTS3/hSSB1與dT48表面等離子共振實驗
4 小結(jié)與討論
參考文獻
作者簡歷及科研成果



本文編號：3177376