發(fā)布時間：2021-04-28 04:44

　　G蛋白偶聯(lián)受體（GPCRs）廣泛參與了脊椎動物的生理與病理過程,因而一直是新藥發(fā)現(xiàn)及研究的最重要靶點。在800多個GPCRs中,孤兒GPCRs是一類內(nèi)源性配體未知的GPCRs,被認(rèn)為是藥物研發(fā)的潛在靶點。因此,鑒定其內(nèi)源性配體進行去孤兒化具有重要的臨床意義,廣泛受到學(xué)者的關(guān)注。然而,越來越多研究證明GPCR（包括一些孤兒的受體）,可以配體非依賴的形式組成型的激活G蛋白信號。G蛋白偶聯(lián)受體39（GPR39）就是一類具有組成型活性的孤兒GPCR。在本文中,我們首先對GPR39進行了脊椎動物的系統(tǒng)進化分析和正選擇分析,發(fā)現(xiàn)GPR39在脊椎動物的不同分支經(jīng)歷了正選擇,而且不同物種的正選擇位點位于受體的不同結(jié)構(gòu)域。其次,我們證明人GPR39、雞GPR39、蛙GPR39和斑馬魚GPR39可以配體非依賴的形式組成型激活Gq和G12信號通路。與其他物種相比,斑馬魚GPR39也可以配體非依賴的形式組成型激活Gs信號通路,并且斑馬魚的H296^7.35位點是Gs信號通路活性的關(guān)鍵位點。我們進一步發(fā)現(xiàn)不同物種的正選擇位點對不同的G蛋白信號通路有不同的影響。我們的結(jié)果表明,孤兒受體GPR3... 

【文章來源】：南京師范大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 GPCR概述
    1.2 GPR39的發(fā)現(xiàn)及研究進展
    1.3 本研究的目的和意義
第2章 胃饑餓素/神經(jīng)降壓素肽受體亞家族的進化
    2.1 實驗方法
        2.1.1 樣本選取
        2.1.2 數(shù)據(jù)分析
    2.2 實驗結(jié)果
        2.2.1 胃饑餓素/神經(jīng)降壓素肽受體亞家族的系統(tǒng)發(fā)育樹分析
        2.2.2 胃饑餓素/神經(jīng)降壓素肽受體亞家族選擇壓力分析
        2.2.3 胃饑餓素/神經(jīng)降壓素肽受體亞家族相似性與一致性分析
    2.3 討論
第3章 脊椎動物中不同物種GPR39信號通路研究
    3.1 實驗材料
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 主要儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建和細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 基因克隆
        3.2.3 螢火蟲熒光素酶報告基因檢測
        3.2.4 報告基因抑制劑檢測
        3.2.5 Western blot實驗
        3.2.6 細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測
        3.2.7 磷酸化ERK檢測
        3.2.8 數(shù)據(jù)分析方法
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 不同物種GPR39信號通路
        3.3.2 G蛋白抑制劑對GPR39組成型活性的影響
        3.3.3 GPR39在體內(nèi)和體外的蛋白表達(dá)情況
        3.3.4 NTS對不同物種GPR39 刺激作用研究
    3.4 討論
第4章 調(diào)控不同物種GPR39組成型活性的關(guān)鍵位點研究
    4.1 實驗材料
        4.1.1 主要試劑
        4.1.2 主要儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 點突變實驗
        4.2.2 不同物種GPR39點突變的螢火蟲熒光素酶報告基因檢測情況
        4.2.3 不同物種GPR39點突變蛋白表達(dá)情況
        4.2.4 Ballesteros-Weinstein編號方法
        4.2.5 數(shù)據(jù)分析方法
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 哺乳動物GPR39點突變信號通路和蛋白表達(dá)情況
        4.3.2 兩棲類GPR39點突變信號通路和蛋白表達(dá)情況
        4.3.3 魚類GPR39點突變信號通路和蛋白表達(dá)情況
        4.3.4 Zebrafish-H2967.35位點是Gs信號通路活性的關(guān)鍵位點
    4.4 討論
第5章 結(jié)論
    5.1 首次發(fā)現(xiàn)GPR39在脊椎動物不同分支經(jīng)歷了選擇壓力
    5.2 首次通過實驗證明脊椎動物中不同物種GPR39激活的信號通路
    5.3 本論文研究展望
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]分子生物學(xué)論文中同源性、相似性、一致性使用調(diào)查及規(guī)范探討[J]. 宋亞珍,劉楓,潘新社,裴阿衛(wèi),南紅梅.  中國科技期刊研究. 2013(02)
[2]Gene duplication plays a major role in gene co-option: Studies into the evolution of the motilin/ghrelin family and their receptors[J]. Irwin M. DAVID.  Chinese Science Bulletin. 2011(25)
[3]同源性、一致性和相似性的辨析[J]. 宋亞珍,南紅梅,劉楓,潘新社,裴阿衛(wèi).  中國科技術(shù)語. 2011(02)



本文編號：3164825