目的:探討OCT4基因過表達(dá)對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（human bone marrow derived mesenchymal stem cells,h BMMSC）i PSC相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子（c MYC、KLF4、LIN28、NANOG、SOX2）表達(dá)的影響,為從骨髓造血微環(huán)境的角度探索血液系統(tǒng)疾病如白血病、再生障礙性貧血等的發(fā)生機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:首先構(gòu)建重組質(zhì)粒pcDNA3.1-OCT4表達(dá)載體,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方式將上述表達(dá)質(zhì)粒導(dǎo)入第3-4代hBMMSC,分別通過PCR及流式細(xì)胞術(shù)對OCT4 mRNA和OCT4蛋白的過表達(dá)進(jìn)行驗(yàn)證,然后經(jīng)G418抗性加壓下有限稀釋和連續(xù)亞克隆的方法篩選出穩(wěn)定表達(dá)OCT4的細(xì)胞（hBMMSC-OCT4）,分別通過RT-PCR和流式細(xì)胞術(shù)測定iPSC相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子（cMYC、KLF4、LIN28、NANOG、SOX2）mRNA和蛋白的表達(dá),觀察OCT4過表達(dá)對iPSC相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的影響。結(jié)果:成功構(gòu)建了攜帶OCT4的重組表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-OCT4;通過有限稀釋和連續(xù)亞克隆的方法篩選出穩(wěn)定表達(dá)OCT4的細(xì)胞（hBMMSC-OCT4）;流式細(xì)胞... 

【文章來源】：中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2020,28(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    試劑與儀器
    OCT4基因序列的人工合成
    重組質(zhì)粒pcDNA3.1-OCT4的構(gòu)建及酶切鑒定
    重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染hBMMSC及陽性克隆的鑒定（按照Lipofectamine?2000的說明書進(jìn)行操作）
    人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（hBMMSC）的培養(yǎng)
    OCT4及其它干性轉(zhuǎn)錄因子（c MYC、KLF4、LIN28、NANOG、SOX2）mRNA表達(dá)的RT-PCR測定
    瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞中OCT4 m RNA相對表達(dá)量的real-time PCR測定
    干性轉(zhuǎn)錄因子（c MYC、KLF4、Lin28、NANOG、OCT4、SOX2）蛋白表達(dá)的流式細(xì)胞術(shù)測定
    統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
結(jié)果
    重組質(zhì)粒pcDNA3.1-OCT4的構(gòu)建及酶切鑒定
    穩(wěn)定高表達(dá)OCT4的hBMMSC（hBMMSC-OCT4）的建立
    hBMMSC-OCT4中干性相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)變化hBMMSC-OCT
    hBMMSC-OCT4中干性相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子間的相關(guān)性分析
討論



本文編號：3135902