檸條錦雞兒是豆科植物,生長(zhǎng)在荒漠或半荒漠地區(qū),具有降血脂,抗氧化以及抗癌等生物學(xué)作用,同時(shí),對(duì)環(huán)境的生態(tài)適應(yīng)性較高,抗逆性極強(qiáng),具有重要的研究?jī)r(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。為了挖掘檸條錦雞兒中抗旱相關(guān)基因資源,實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建了苗期干旱處理的cDNA文庫(kù)并進(jìn)行了高通量測(cè)序。通過(guò)生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)了49個(gè)干旱上調(diào)表達(dá)基因,其中包含了6個(gè)WRKY轉(zhuǎn)錄因子。在此基礎(chǔ)上,本研究以擬南芥Col-0生態(tài)型為受體材料,通過(guò)構(gòu)建表達(dá)載體、轉(zhuǎn)化擬南芥、獲得轉(zhuǎn)基因擬南芥純合株系和干旱相關(guān)表型測(cè)定,獲得了如下研究結(jié)果:（1）將6個(gè)WRKY轉(zhuǎn)錄因子的序列和擬南芥基因組數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì),根據(jù)序列的同源性比對(duì)結(jié)果將6個(gè)WRKY轉(zhuǎn)錄因子分別命名為CkWRKY2,CkWRKY4,CkWRKY20,CkWRKY23,CkWRKY51和CkWRKY75。這些基因的cDNA編碼區(qū)全長(zhǎng)分別為1614bp,1386bp,1527bp,1107bp,618bp和951bp,分別編碼537個(gè),461個(gè),508個(gè),368個(gè),205個(gè)和316個(gè)氨基酸。根據(jù)WRKY結(jié)構(gòu)域數(shù)目和鋅指結(jié)構(gòu)類型,將6個(gè)WRKY轉(zhuǎn)錄因子分為3類,其中,CkWRKY2,CkWRK... 

【文章來(lái)源】：海南師范大學(xué)海南省

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

WRKY轉(zhuǎn)錄因子的分類（文鋒等，2017）

圖 1.2 一個(gè)月大苗齡檸條錦雞兒干旱處理前后表型及高通量測(cè)序差異基因（a）圖為干旱處理前后植株表型變化；（b）圖為干旱植株較未干旱植株結(jié)果。Figure 1.2 Graph showing the difference between phenotype and high-thrsequencing after drought treatment in Caragana korshinskii . (a) the phechanges of plants before and after drought treatment.; (b) the sequencing redrought plants compared with non-drought plants.1.6 研究目的及意義WRKY 轉(zhuǎn)錄因子是一大類調(diào)節(jié)蛋白，它們?cè)陧憫?yīng)生物和非生物脅迫重要的作用（Guo et al., 2018）。WRKY 家族還是一類高度保守的轉(zhuǎn)錄因子（a） （b）

海南師范大學(xué)碩士學(xué)位論文多序列比對(duì)采用 geneDoc（下載地址：https://github.com/karlnicholas/GeneDo軟件比對(duì)，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)使用 MEGA7.0 軟件。2.2.2.3 植物 WRKY 結(jié)構(gòu)域的保守性分析利用 geneDoc 進(jìn)行 WRKY 多序列比對(duì)，比對(duì)結(jié)果進(jìn)行 WRKY 結(jié)構(gòu)域的保守性分析。2.2.3 構(gòu)建表達(dá)載體2.2.3.1 雙酶切獲得載體骨架本研究選用 35S-Red-Kan，采用 In-Fusion 同源重組構(gòu)建植物表達(dá)載體。用限制性內(nèi)切酶 EcoRI 和 XmaI 對(duì) 35S-Red-Kan 載體質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切。獲得雙酶切骨架，回收骨架用于目的片段的連接。


本文編號(hào)：3128198