利用小鼠淋巴瘤細(xì)胞L5178Y tk^+/--3.7.2C和陰性化合物Glc、NaCl及陽(yáng)性化合物EMS、ENU、4-NQO、B （a） P建立并驗(yàn)證基于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的體外Pig-a基因突變檢測(cè)方法。計(jì)算細(xì)胞相對(duì)倍增速率評(píng)價(jià)細(xì)胞毒性,抗體標(biāo)記突變型細(xì)胞確定流式檢測(cè)模板,L5178Y細(xì)胞經(jīng)EMS處理后第4、8、12、16、20天檢測(cè)Pig-a基因突變頻率,確定最大突變頻率發(fā)生時(shí)間點(diǎn),免疫熒光技術(shù)檢測(cè)CD90蛋白在細(xì)胞中的定位情況,采用PCR方法進(jìn)行突變位點(diǎn)分析。結(jié)果表明:（1） Glc、NaCl、EMS、ENU、B （a） P、4-NQO所設(shè)濃度組RPD均大于50%。（2）基因突變頻率在給藥后第8天出現(xiàn)峰值。Glc和NaCk致Pig-a基因突變頻率均小于200×10^-6,各濃度組與溶劑對(duì)照組間不存在顯著性差異（P>0.05）,EMS、ENU、B （a）P、4-NQO均可引起Pig-a基因突變頻率增加,且與溶劑對(duì)照組相比存在顯著性差異。（3）免疫熒光成像顯示突變型細(xì)胞表面無(wú)CD90蛋白,野生型細(xì)胞正常表達(dá)CD45,CD90蛋白。（4）基因突變... 

【文章來(lái)源】：生物技術(shù)通報(bào). 2020,36(01)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

不同受試物給藥24 h或4 h后的RPD（±s,n=3)

EMS、ENU、NaCl、Glc作用24h,B(a)P、4-NQO給藥4 h表達(dá)8 d Pig-a基因突變頻率檢測(cè)結(jié)果（圖5-6）顯示，非S9代謝活化條件下，EMS濃度大于100μg/mL時(shí)，Pig-a基因突變率與溶媒對(duì)照組相比，存在顯著性差異（*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001），且呈濃度遞增趨勢(shì)；ENU濃度大于125μg/mL時(shí)，Pig-a基因突變率與溶媒對(duì)照組相比，存在顯著性差異（**P<0.01,***P<0.001），且呈濃度遞增趨勢(shì)。圖4 Pig-a基因突突變頻率表達(dá)周期

圖3 流式突變區(qū)域確認(rèn)與質(zhì)控圖S9代謝活化條件下，當(dāng)B(a)P濃度大于2.0μg/mL時(shí)，Pig-a基因突變率與溶媒對(duì)照組相比，存在顯著性差異（*P<0.05,***P<0.001），且成濃度遞增趨勢(shì)。當(dāng)4-NQO濃度大于0.075μg/mL時(shí)Pig-a基因突變率與溶媒對(duì)照組相比，存在顯著性差異（*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001），且成濃度遞增趨勢(shì)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于TK6細(xì)胞的體外PIG-A基因突變檢測(cè)方法的建立[J]. 李若婉,周長(zhǎng)慧,黃鵬程,常艷.  癌變·畸變·突變. 2019(03)
[2]亞硝基脲對(duì)DNA損傷作用的研究進(jìn)展[J]. 白寶清,趙麗嬌,鐘儒剛.  化學(xué)通報(bào). 2010(03)



本文編號(hào)：3128031