為提高Tremetes viscolor漆酶Lcc的表達(dá)量,本研究主要針對漆酶轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)域進(jìn)行定向進(jìn)化。利用易錯PCR,選擇不同濃度的Mn2+對調(diào)節(jié)區(qū)域進(jìn)行突變,并以釀酒酵母為宿主細(xì)胞進(jìn)行異源表達(dá),構(gòu)建S. c/p YES2-Lcc調(diào)節(jié)子突變庫。選用2,2-聯(lián)氮基雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二胺鹽（ABTS）為底物的96孔板測定漆酶酶活高通量篩選方法對突變庫中960株突變體進(jìn)行篩選,并對酶活高的突變體進(jìn)行搖瓶復(fù)篩,最終獲得三株遺傳穩(wěn)定性良好的酶活較高地突變體M1、M2、M3,其粗酶液酶活分別是野生型菌株粗酶液酶活的1. 73倍、1. 46倍、1. 37倍,突變菌株M1粗酶液酶活最高可達(dá)35. 4 U/L。 

【文章來源】：山東化工. 2020,49(09)

【文章頁數(shù)】：3 頁

【部分圖文】：

ep PCR產(chǎn)物及克隆產(chǎn)物電泳結(jié)果

重組質(zhì)粒調(diào)節(jié)區(qū)域示意圖

對挑取的突變子利用ABTS檢測方法進(jìn)行初篩，以ABTS為底物測得酶活力高于野生型1.3倍的有46株。對46個優(yōu)勢菌株進(jìn)行96孔板復(fù)篩，每個突變體設(shè)置4個平行樣，獲得13個優(yōu)勢突變體;最后對13個優(yōu)勢突變體進(jìn)行搖瓶復(fù)篩，結(jié)果如圖3所示。其中，酶活是野性型酶活1.5倍以上的突變株有3株，1.29～1.5倍的突變株有7株，1.04～1.2倍的突變株有3株。突變體M1酶活最高，可達(dá)35.4 U/L。2.3 突變體序列測定及比對

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]耐熱性細(xì)菌漆酶的高效表達(dá)及其在紙漿生物漂白中的應(yīng)用[D]. 鄭志強(qiáng).江南大學(xué) 2015



本文編號：3122026