為提高Tremetes viscolor漆酶Lcc的表達量,本研究主要針對漆酶轉錄調節(jié)區(qū)域進行定向進化。利用易錯PCR,選擇不同濃度的Mn2+對調節(jié)區(qū)域進行突變,并以釀酒酵母為宿主細胞進行異源表達,構建S. c/p YES2-Lcc調節(jié)子突變庫。選用2,2-聯(lián)氮基雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二胺鹽（ABTS）為底物的96孔板測定漆酶酶活高通量篩選方法對突變庫中960株突變體進行篩選,并對酶活高的突變體進行搖瓶復篩,最終獲得三株遺傳穩(wěn)定性良好的酶活較高地突變體M1、M2、M3,其粗酶液酶活分別是野生型菌株粗酶液酶活的1. 73倍、1. 46倍、1. 37倍,突變菌株M1粗酶液酶活最高可達35. 4 U/L。 

【文章來源】：山東化工. 2020,49(09)

【文章頁數(shù)】：3 頁

【部分圖文】：

ep PCR產(chǎn)物及克隆產(chǎn)物電泳結果

重組質粒調節(jié)區(qū)域示意圖

對挑取的突變子利用ABTS檢測方法進行初篩，以ABTS為底物測得酶活力高于野生型1.3倍的有46株。對46個優(yōu)勢菌株進行96孔板復篩，每個突變體設置4個平行樣，獲得13個優(yōu)勢突變體;最后對13個優(yōu)勢突變體進行搖瓶復篩，結果如圖3所示。其中，酶活是野性型酶活1.5倍以上的突變株有3株，1.29～1.5倍的突變株有7株，1.04～1.2倍的突變株有3株。突變體M1酶活最高，可達35.4 U/L。2.3 突變體序列測定及比對

【參考文獻】：
期刊論文
[1]漆酶在食品工業(yè)及其他領域上的應用進展[J]. 胡周月,錢磊,張志軍,張業(yè)尼.  天津農學院學報. 2019(03)
[2]漆酶在環(huán)境保護中的應用研究進展[J]. 馬倩倩,趙麗紅,陳威.  工業(yè)安全與環(huán)保. 2019(08)
[3]刺芹側耳產(chǎn)漆酶條件優(yōu)化及對偶氮染料甲基橙的脫色[J]. 譚小珊,王帥杰,吳科元,齊鵬,胡佩雯,張靜.  菌物學報. 2019(10)
[4]漆酶的研究進展及其應用[J]. 劉戀,楊清.  山東化工. 2019(03)
[5]酵母表達系統(tǒng)研究概述[J]. 田曉娟.  隴東學院學報. 2018(01)
[6]定向進化技術的最新進展[J]. 曲戈,趙晶,鄭平,孫際賓,孫周通.  生物工程學報. 2018(01)
[7]真核生物來源漆酶的異源表達研究進展[J]. 寧娜,譚慧軍,孫新新,倪金鳳.  生物工程學報. 2017(04)
[8]釀酒酵母基因工程菌的構建及工藝優(yōu)化研究進展[J]. 李媛,張愛麗,周偉,錢子剛.  中國民族民間醫(yī)藥. 2016(18)
[9]靈芝漆酶研究進展[J]. 錢磊,張志軍.  食用菌. 2016(04)
[10]漆酶基因異源表達及其酶活性的研究進展[J]. 劉曉慶,那日,郭九峰.  安徽農業(yè)科學. 2016(01)

博士論文
[1]耐熱性細菌漆酶的高效表達及其在紙漿生物漂白中的應用[D]. 鄭志強.江南大學 2015



本文編號：3122026