目前,食源性致病菌依然是危害公共衛(wèi)生的一大因素,已經(jīng)引起社會各界的廣泛重視,金葡菌就是最為常見的食源性致病菌之一。黏附是宿主中致病菌定植和感染的第一步,被認(rèn)為是重要的威脅因素之一。通常認(rèn)為益生菌可以通過空間位阻抑制致病菌的黏附并減少其在體內(nèi)的積累。然而,有研究表明,一些乳桿菌能促進(jìn)致病菌黏附,有人認(rèn)為這可能是因?yàn)橐嫔环矫媾c腸道黏附,另一方面與致病菌黏附,但具體機(jī)制尚不清楚。因此本研究采用前期篩選的益生性唾液乳桿菌與金葡菌為研究對象,試圖從膜外蛋白角度研究益生菌是否通過膜外蛋白促進(jìn)金葡菌黏附。首先我們研究了唾液乳桿菌與金葡菌的直接黏附效果。將菌株分別離心稀釋,唾液乳桿菌與金葡菌共同作用4小時(shí)后,通過顯微鏡觀察了唾液乳桿菌與金葡菌是否直接黏附,進(jìn)一步提取唾液乳桿菌膜外蛋白,通過電鏡和蛋白包被法研究其與金葡菌黏附效果。培養(yǎng)Caco-2細(xì)胞,通過結(jié)晶紫染色和涂板計(jì)數(shù)兩種方法驗(yàn)證膜外蛋白是否間接促進(jìn)金葡菌對細(xì)胞的黏附作用。為了分析基于唾液乳桿菌膜外蛋白促進(jìn)金葡菌黏附的分子機(jī)制,通過前期質(zhì)譜結(jié)果選取評分最高的細(xì)菌底物結(jié)合蛋白ABC transporter substrate-binding p... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

提取質(zhì)粒流程圖

pET-28a質(zhì)粒圖譜

2.2.3.3 ABCtsb 與 pET-28a 載體重組質(zhì)粒的構(gòu)建ABCtsb 與 pET-28a 載體重組質(zhì)粒的構(gòu)建如圖 3 所示。將 ABCtsb 的 PCR 物與 pET-28a 載體分別進(jìn)行雙酶切。反應(yīng)體系如表 6 所示， 50 μL：25 μL PC產(chǎn)物或 pET-28a 載體，5 μL Buffer，BamH Ⅰ1μL，XhoⅠ1μL，ddH2O 補(bǔ)至 50 μ37 ℃ 水浴鍋中孵育 3 小時(shí)。結(jié)束后按照 2.2.3.2 方法進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，再按照 2.2.3.3 方法進(jìn)行膠回收。將膠回收產(chǎn)物進(jìn)行連接，連接體系為 0.5 μLT4 連接酶，1 μL Buffer，PCR 物與 pET-28a 載體按照不同比例加入，最后 ddH2O 補(bǔ)至 10 μL，16℃ 水浴鍋連接過夜。


本文編號：3114930