目前,食源性致病菌依然是危害公共衛(wèi)生的一大因素,已經(jīng)引起社會各界的廣泛重視,金葡菌就是最為常見的食源性致病菌之一。黏附是宿主中致病菌定植和感染的第一步,被認為是重要的威脅因素之一。通常認為益生菌可以通過空間位阻抑制致病菌的黏附并減少其在體內(nèi)的積累。然而,有研究表明,一些乳桿菌能促進致病菌黏附,有人認為這可能是因為益生菌一方面與腸道黏附,另一方面與致病菌黏附,但具體機制尚不清楚。因此本研究采用前期篩選的益生性唾液乳桿菌與金葡菌為研究對象,試圖從膜外蛋白角度研究益生菌是否通過膜外蛋白促進金葡菌黏附。首先我們研究了唾液乳桿菌與金葡菌的直接黏附效果。將菌株分別離心稀釋,唾液乳桿菌與金葡菌共同作用4小時后,通過顯微鏡觀察了唾液乳桿菌與金葡菌是否直接黏附,進一步提取唾液乳桿菌膜外蛋白,通過電鏡和蛋白包被法研究其與金葡菌黏附效果。培養(yǎng)Caco-2細胞,通過結(jié)晶紫染色和涂板計數(shù)兩種方法驗證膜外蛋白是否間接促進金葡菌對細胞的黏附作用。為了分析基于唾液乳桿菌膜外蛋白促進金葡菌黏附的分子機制,通過前期質(zhì)譜結(jié)果選取評分最高的細菌底物結(jié)合蛋白ABC transporter substrate-binding p... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

提取質(zhì)粒流程圖

pET-28a質(zhì)粒圖譜

2.2.3.3 ABCtsb 與 pET-28a 載體重組質(zhì)粒的構(gòu)建ABCtsb 與 pET-28a 載體重組質(zhì)粒的構(gòu)建如圖 3 所示。將 ABCtsb 的 PCR 物與 pET-28a 載體分別進行雙酶切。反應(yīng)體系如表 6 所示， 50 μL：25 μL PC產(chǎn)物或 pET-28a 載體，5 μL Buffer，BamH Ⅰ1μL，XhoⅠ1μL，ddH2O 補至 50 μ37 ℃ 水浴鍋中孵育 3 小時。結(jié)束后按照 2.2.3.2 方法進行瓊脂糖凝膠電泳，再按照 2.2.3.3 方法進行膠回收。將膠回收產(chǎn)物進行連接，連接體系為 0.5 μLT4 連接酶，1 μL Buffer，PCR 物與 pET-28a 載體按照不同比例加入，最后 ddH2O 補至 10 μL，16℃ 水浴鍋連接過夜。


本文編號：3114930