目的探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（hucMSCs）對(duì)人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞增殖與遷移的影響及其可能機(jī)制。方法采用Ⅱ型膠原酶消化法從新生兒臍帶中分離制備hucMSCs,用流式細(xì)胞術(shù)鑒定P3代hucMSCs表面標(biāo)記抗原,用油紅O染色、茜素紅S染色和Masson染色進(jìn)行間充質(zhì)干細(xì)胞三向分化能力鑒定;以人表皮角質(zhì)細(xì)胞系HaCaT為研究模型,在transwell上室接種P3代hucMSCs進(jìn)行共培養(yǎng),顯微鏡觀察24、48和72 h時(shí)HaCaT的細(xì)胞形態(tài),CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖狀況,劃痕法檢測(cè)細(xì)胞12 h和24 h遷移率,qRT-PCR法測(cè)定HaCaT細(xì)胞遷移、增殖相關(guān)生長(zhǎng)因子KGF-2、FGFR-2、TGF-β1,以及細(xì)胞外基質(zhì)蛋白Fibronectin、MMP-1和Collagen Ⅰ mRNA表達(dá)水平。結(jié)果 hucMSCs呈成纖維細(xì)胞樣貼壁生長(zhǎng),其表面間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)志性抗原CD105、CD90、CD73陽(yáng)性表達(dá)率分別為98.35%、99.97%和99.94%,不表達(dá)CD45、CD34、CD14和CD19,在誘導(dǎo)培養(yǎng)16d后出現(xiàn)明顯的成脂、成骨和成軟骨細(xì)胞特性。hucMSCs共培養(yǎng)24、48和72 h,... 

【文章來源】：中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù). 2020,15(03)

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【部分圖文】：

huc MSCs表面標(biāo)志性抗原流式鑒定結(jié)果（A：總細(xì)胞散點(diǎn)分布；B：活性細(xì)胞；C：陰性對(duì)照；D～F:CD105+、CD90+、CD73+細(xì)胞比例；G：陽(yáng)性細(xì)胞比例）

圖5 huc MSCs共培養(yǎng)對(duì)HaCaT細(xì)胞遷移的影響（A:huc MSCs共培養(yǎng)12 h、24 h細(xì)胞向劃痕區(qū)域遷移狀況；B:huc MSCs共培養(yǎng)12和24 h時(shí)細(xì)胞劃痕區(qū)面積的變化；*P<0.05)3 討論

將hucMSCs處理組與對(duì)照組的A450作差，再與對(duì)照組A450作比，計(jì)算HaCaT細(xì)胞存活率的增加比例。結(jié)果顯示（圖4、表2),hucMSCs與HaCaT共培養(yǎng)24、48和72 h,Ha Ca T細(xì)胞存活率分別顯著增加了20.42%(P<0.01）、36.30%(P<0.01）和27.31%(P<0.05），與形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果（圖3）一致。提示hucMSCs共培養(yǎng)能夠持續(xù)促進(jìn)HaCaT細(xì)胞的增殖。圖3 huc MSCs共培養(yǎng)對(duì)HaCaT細(xì)胞生長(zhǎng)及形態(tài)的影響（×100)


本文編號(hào)：3114483