副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis,H.parasuis）是存在于豬上呼吸道的條件致病菌,豬感染H.parasuis時(shí)發(fā)病主要是一系列炎癥反應(yīng),死亡率高達(dá)50%,每年給豬的養(yǎng)殖業(yè)造成巨大損失。外膜囊泡（Outer membrane vesicles,OMVs）能攜帶多種蛋白質(zhì)、脂多糖等病原相關(guān)分子模式（PAMPs）進(jìn)入宿主細(xì)胞,誘導(dǎo)細(xì)胞炎癥反應(yīng)甚至死亡。H.parasuis能分泌OMVs,但其生物學(xué)特性及對(duì)宿主細(xì)胞作用還鮮有研究。本研究以血清5型強(qiáng)毒株H45為研究對(duì)象,以密度梯度離心法提純OMVs,觀察其結(jié)構(gòu)及測(cè)定其粒徑,進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析;研究OMVs和H.parasuis對(duì)小鼠單核巨噬細(xì)胞RAW 264.7的毒力和致炎作用,并研究caspase-11基因?qū)MVs介導(dǎo)細(xì)胞致炎作用的影響;利用同源重組技術(shù)構(gòu)建H45的lpx M基因缺失株,研究該基因缺失對(duì)H45生長(zhǎng)情況、抗血清殺菌能力、生物被膜形成能力、對(duì)細(xì)胞毒力作用和部分抗生素敏感性的影響。利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析,結(jié)果如下:1.從H45中提取的OMVs呈球形,粒徑分布在60-70 nm之間,平均粒... 

【文章來(lái)源】：華南理工大學(xué)廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：106 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

LPS的結(jié)構(gòu)及位置分布[111]

華南理工大學(xué)碩士學(xué)位論文20圖2-1H45的鑒定及血清分型Fig.2-1theidentificationandserotypingofH45注：M為DL2000DNAMaker；1,+,-為鑒定是否為HPS，分別為H45、陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照（1090bp）；2,+,-為鑒定H45血清型，為別為H45、陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照（450bp）。2.4.2OMVs的SDS-PAGE電泳考馬斯亮藍(lán)染色結(jié)果將OMVs經(jīng)密度梯度離心后，收集各個(gè)密度的樣品進(jìn)行SDS-PAGE電泳，并對(duì)蛋白膠進(jìn)行考馬斯亮染色，觀察到蛋白質(zhì)主要集中在2和3泳道，即20%和25%的密度層，少部分蛋白質(zhì)集中在樣品層，OMVs蛋白質(zhì)主要大小集中在60kDa~75kDa和180kDa左右。圖2-2OMVs各個(gè)密度梯度的SDS-PAGE電泳圖Fig.2-2SDS-PAGEelectrophoresisdiagramofeachdensitygradientofOMVs注：M為310kDa大小的蛋白Maker；1-7分別為樣品層、密度梯度20%、25%、30%、35%、40%和45%樣品的SDS-PAGE電泳結(jié)果。

華南理工大學(xué)碩士學(xué)位論文20圖2-1H45的鑒定及血清分型Fig.2-1theidentificationandserotypingofH45注：M為DL2000DNAMaker；1,+,-為鑒定是否為HPS，分別為H45、陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照（1090bp）；2,+,-為鑒定H45血清型，為別為H45、陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照（450bp）。2.4.2OMVs的SDS-PAGE電泳考馬斯亮藍(lán)染色結(jié)果將OMVs經(jīng)密度梯度離心后，收集各個(gè)密度的樣品進(jìn)行SDS-PAGE電泳，并對(duì)蛋白膠進(jìn)行考馬斯亮染色，觀察到蛋白質(zhì)主要集中在2和3泳道，即20%和25%的密度層，少部分蛋白質(zhì)集中在樣品層，OMVs蛋白質(zhì)主要大小集中在60kDa~75kDa和180kDa左右。圖2-2OMVs各個(gè)密度梯度的SDS-PAGE電泳圖Fig.2-2SDS-PAGEelectrophoresisdiagramofeachdensitygradientofOMVs注：M為310kDa大小的蛋白Maker；1-7分別為樣品層、密度梯度20%、25%、30%、35%、40%和45%樣品的SDS-PAGE電泳結(jié)果。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]脂多糖修飾對(duì)革蘭陰性菌毒力及外膜囊泡生物學(xué)特性影響的研究進(jìn)展[J]. 楊君,李冰,蔡汝健,宋帥,勾紅潮,楚品品,卞志標(biāo),王令,閆鶴,李春玲.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2020(02)
[2]副豬嗜血桿菌vacJ基因缺失菌株構(gòu)建及其生物學(xué)特性分析[J]. 趙良友,高雪麗,劉超男,申海龍,姜南,萬(wàn)偉泉,呂曉萍,鄭世民.  華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2017(05)
[3]嗜水氣單胞菌外膜囊泡組分及功能分析[J]. 孫莉娜,姚祖杰,譚禮寧,李碗芯,胡文杰,林玲,林向民.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2015(12)
[4]副豬嗜血桿菌病的危害與防治[J]. 蔡旭旺,陳煥春,吳斌,劉正飛.  養(yǎng)殖與飼料. 2003(05)

博士論文
[1]副豬嗜血桿菌感染致炎癥相關(guān)信號(hào)通路的研究[D]. 陳雨珊.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016

碩士論文
[1]副豬嗜血桿菌dsbA基因缺失株的構(gòu)建及功能研究[D]. 李蘭穎.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[2]副豬嗜血桿菌wza基因在其粘附和抗吞噬中的作用研究[D]. 曹瑞娟.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[3]銅綠假單胞菌外膜囊泡的研究[D]. 張佳星.重慶醫(yī)科大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3102165