大腸桿菌O157:H7和沙門菌都是常見的食源性致病菌。大腸桿菌O157:H7傳染劑量低至10個(gè)菌,因此建立一種高靈敏的大腸桿菌O157:H7檢測(cè)方法是必要的;沙門菌的血清群較多且難以分型,給沙門菌的溯源工作帶來了較大難度,因此建立一種快速高通量的沙門菌分群方法是必要的。本文中,我們建立了大腸桿菌O157:H7的高靈敏檢測(cè)方法和沙門菌高通量分群方法。雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（hybridization chain reaction,HCR）是一種不需要酶的等溫核酸自組裝反應(yīng)。近年來,HCR被廣泛應(yīng)用在檢測(cè)信號(hào)放大的研究中。本文第二章,我們將免疫學(xué)與HCR相結(jié)合,建立了一種免疫HCR去檢測(cè)大腸桿菌O157:H7。我們發(fā)現(xiàn)當(dāng)HCR的引發(fā)鏈（Initiator）和抗體共同標(biāo)記于一個(gè)乳膠微球上,抗體會(huì)干擾引發(fā)鏈（Initiator）參與HCR反應(yīng),導(dǎo)致了陽性信號(hào)不強(qiáng),靈敏度不高;我們?cè)O(shè)計(jì)引入一條互補(bǔ)鏈（C-Initiator）,將互補(bǔ)鏈和抗體標(biāo)記在同一個(gè)乳膠微球上,而引發(fā)鏈（Initiator）單獨(dú)標(biāo)記在另一個(gè)乳膠微球上。這種策略降低了抗體對(duì)引發(fā)鏈（Initiator）參與HCR反應(yīng)的干擾,從而增強(qiáng)信號(hào),提... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

枝狀HCR的原理

第二章 基于雙球的大腸桿菌 O157:H7 免疫 HCR 信號(hào)放大檢測(cè)方法的建立不同于基于單球的免疫 HCR 放大,引發(fā)鏈和抗體（mAb）同時(shí)標(biāo)記在一個(gè)乳膠微球（latex nanoparticles，LNPs）上�？贵w（mAb）干擾引發(fā)鏈與發(fā)夾的 HCR反應(yīng)，導(dǎo)致熒光信號(hào)不強(qiáng)，靈敏度不高；在本研究中，我們將抗體與互補(bǔ)鏈標(biāo)記在同一個(gè)乳膠微球上，而引發(fā)鏈則單獨(dú)標(biāo)記在另一個(gè)乳膠微球上。這種雙球策略不僅提高引發(fā)鏈的載量，也降低了抗體（mAb）對(duì)引發(fā)鏈的干擾，提高引發(fā)效率和檢測(cè)方法的靈敏度。

第二章 基于雙球的大腸桿菌 O157:H7 免疫 HCR 信號(hào)放大檢測(cè)方法的建立2.4.1.2 核酸序列的電泳驗(yàn)證我們使用了瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證是否能夠發(fā)生我們所設(shè)計(jì)的 HCR 反應(yīng)。結(jié)果如圖 2.3 所示：在沒有引發(fā)鏈存在的情況下（圖 2.3 泳道 1-4），H1 和 H2 不能夠相互引發(fā)；當(dāng)引發(fā)鏈由高濃度變?yōu)榈蜐舛葧r(shí)候（圖 2.3 泳道 5-9），HCR 產(chǎn)物中短鏈（1000bp 以下）的含量越來越少，當(dāng)引發(fā)鏈濃度過低時(shí)（圖 2.3 泳道 9），大部分發(fā)卡沒有參與 HCR 反應(yīng)；從圖 3.3 泳道 10，我們可以得知互補(bǔ)鏈不能夠引發(fā) H1 和 H2。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]中國(guó)六省份零售整雞中沙門菌血清型分布和耐藥性特征研究[J]. 胡豫杰,赫英英,王曄茹,劉暢,王美美,甘辛,王偉,閆韶飛,白瑤,彭子欣,李鳳琴,徐進(jìn).  中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志. 2018 (04)
[2]免疫磁分離結(jié)合膠體金免疫層析法快速檢測(cè)大腸桿菌O157∶H7[J]. 崔希,熊齊榮,熊勇華,山珊,賴衛(wèi)華.  分析化學(xué). 2013(12)



本文編號(hào)：3100153