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CRISPR/Cas9技術(shù)編輯OsRhoGDI2基因?qū)е滤景氚?/H1>
發(fā)布時(shí)間:2021-03-24 20:47
  OsRhoGDI2是通過酵母雙雜交從水稻幼穗中分離的一個(gè)與Rho蛋白家族成員OsRacD相互作用蛋白的編碼基因,但功能尚不明確。本研究利用CRISPR/Cas9技術(shù)創(chuàng)制水稻OsRhoGDI2基因敲除突變體。檢測結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因水稻T0代獲得2種純合突變體,T1代獲得8種純合突變體。序列分析顯示,在敲除水稻中,該基因的編輯靶點(diǎn)附近發(fā)生了堿基的替換或缺失,預(yù)期生成喪失RhoGDI保守結(jié)構(gòu)域的截短蛋白。表型比對(duì)分析發(fā)現(xiàn),敲除水稻與對(duì)照相比,株高顯著降低,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示,敲除水稻株高降低源于第Ⅱ和第Ⅲ莖節(jié)的縮短,提示OsRhoGDI2基因可能與水稻株高控制相關(guān)。 

【文章來源】:生物工程學(xué)報(bào). 2020,36(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】:9 頁

【部分圖文】:

CRISPR/Cas9技術(shù)編輯OsRhoGDI2基因?qū)е滤景氚? src='http://www.bigengculture.com/uploads/allimg/20210324/1616590071.09496.jpeg'  style='max-width:500px'></p><br> OsRhoGDI2基因結(jié)構(gòu)及編輯靶點(diǎn)的位置<br><p align='center'><img src='http://image.cnki.net/getimage.ashx?id=SHWU202004014_03300' alt='序列,表達(dá)載體,靶點(diǎn),瓊脂糖' style='max-width:500px'></p><br> pW-T-OsRhoGDI2表達(dá)載體的構(gòu)建<br><br><p align='center'><img src='http://image.cnki.net/getimage.ashx?id=SHWU202004014_03400' alt='序列,靶點(diǎn),瓊脂糖,凝膠電泳' style='max-width:500px'></p><br> 圖2 pW-T-OsRhoGDI2表達(dá)載體的構(gòu)建將上述PCR產(chǎn)物測序,并進(jìn)行序列分析。結(jié)果顯示(表2),T0代獲得雜合株系6個(gè)(占54.5%)、雙等位突變株系2個(gè)(占18.2%)、純合株系2個(gè)(占18.2%)、未被編輯株系1個(gè)(占9.1%)。T0代11個(gè)株系與野生型進(jìn)行編輯靶點(diǎn)序列比對(duì),發(fā)現(xiàn)6個(gè)雜合株系中有2個(gè)(#1、#5)在靶位點(diǎn)2處發(fā)生突變,4個(gè)(#2、#3、#8、#11)在靶位點(diǎn)1處發(fā)生突變;2個(gè)雙等位突變株系(#7、#9)均在靶位點(diǎn)1處發(fā)生突變;2個(gè)純合株系(#6、#10)均在靶位點(diǎn)1處發(fā)生突變(圖4)。 <br><br>【參考文獻(xiàn)】:<br>期刊論文<br>[1]利用CRISPR/Cas9技術(shù)編輯水稻ROP基因OsRac5[J]. 王美娜,彭靜靜,王凱婕,安文靜,劉亞菲,李珂嘉,梁衛(wèi)紅.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2018(12)<br>
[2]利用CRISPR/CAS9技術(shù)編輯水稻香味基因Badh2[J]. 邵高能,謝黎虹,焦桂愛,魏祥進(jìn),圣忠華,唐紹清,胡培松.  中國水稻科學(xué). 2017(02)<br>
[3]Genetic Analysis and Fine Mapping of a Novel Semidominant Dwarfing Gene LB4D in Rice[J]. Fei Liang~(1,2+),Xiaoyun Xin~(1,2+),Zejun Hu~(1,2),Jiandi Xu~3,Gang Wei~1,Xiaoyin Qian~1, Jinshui Yang~1,Haohua He~(2*) and Xiaojin Luo~(1*) 1 State Key Laboratory of Genetic Engineering,Institute of Genetics,School of Life Sciences,Fudan University,Shanghai 200433,China 2Key Laboratory of Crop Physiology,Ecology and Genetic Breeding,Ministry of Education,Jiangxi Agricultural University,Nanchang 330045,China 3 Institute of Rice Research,Shandong Academy of Agricultural Sciences,Jining 272100,China.  Journal of Integrative Plant Biology. 2011(04)<br>
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[5]兩種水稻GDP解離抑制蛋白基因的分離及特征分析[J]. 梁衛(wèi)紅,唐朝榮,吳乃虎.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2004(06)<br>
<br><!--https://kns.cnki.net/kcms/detail/detail.aspx?dbcode=CJFD&dbname=CJFDLAST2020&filename=SHWU202004014&v=CZiOx2EFuBMLfLN5lj5z34Ygc4xj05p8DhxzsYJbkQhBvTvDlWqi7C%25mmd2BXXRQcgbVR-->
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