發(fā)布時間：2021-03-20 02:59

　　細(xì)胞因子是一類小分子可溶性蛋白,對動物的固有免疫和適應(yīng)性免疫起著十分重要的作用。IFN-γ和IL-10作為較為重要的細(xì)胞因子,吸引了眾多研究者的關(guān)注。IFN-γ能直接調(diào)動體內(nèi)的多種免疫原細(xì)胞的增殖與分化,參與所有的I型輔助T細(xì)胞（Th1細(xì)胞）的免疫反應(yīng);IL-10能抑制炎癥反應(yīng)并提高體內(nèi)免疫系統(tǒng)對外來細(xì)菌和病毒的應(yīng)答反應(yīng)。本實驗首先利用基因工程技術(shù),表達(dá)純化得到了鼠源的IFN-γ和IL-10蛋白。利用單克隆抗體技術(shù),篩選出15株穩(wěn)定分泌抗體的雜交瘤細(xì)胞株（分泌IFN-γ抗體的雜交瘤細(xì)胞株2株,分泌IL-10抗體的雜交瘤細(xì)胞株13株）。對分泌IFN-γ抗體的雜交瘤細(xì)胞株2D8進(jìn)行亞型鑒定結(jié)果為Ig G2a型。將雜交瘤細(xì)胞2D8按照每只10⁶個的劑量注入提前用弗氏不完全佐劑處理的小鼠腹腔,通過腹水采集和純化獲得了IFN-γ抗體。本工作中表達(dá)純化得到的IFN-γ和IL-10蛋白,可以為其他研究者進(jìn)一步研究這兩種鼠源細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)與功能及其相關(guān)疾病提供重要的物質(zhì)基礎(chǔ),通過單克隆抗體技術(shù)得到能穩(wěn)定分泌IFN-γ和IL-10抗體的雜交瘤細(xì)胞,可以為后續(xù)建立雙抗夾心ELISA方法... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

IFN-的結(jié)構(gòu)（王海春2012）

IL-10的結(jié)構(gòu)（Walteretal1995）

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2020屆碩士研究生學(xué)位（畢業(yè)）論文12圖1.3單克隆抗體的制備流程（張帝等2014）Fig1.3Preparationprocessofmonoclonalantibody1.6本研究的目的及意義細(xì)胞因子作為各種免疫細(xì)胞和一部分非免疫細(xì)胞所分泌的可溶性小分子蛋白質(zhì)，對機體具有極其廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，包括調(diào)節(jié)機體的免疫應(yīng)答，細(xì)胞間的信號傳遞，調(diào)控免疫細(xì)胞的分裂與分化等。IFN-和IL-10是動物體內(nèi)較為重要的兩種細(xì)胞因子，IFN-作為最重要的炎癥細(xì)胞因子，直接或間接參與著機體中所有的免疫反應(yīng)；IL-10作為生物活性最強的炎癥抑制因子，能直接參與機體內(nèi)Th1和Th2細(xì)胞間免疫調(diào)節(jié)。因此，這兩種細(xì)胞因子的表達(dá)水平可以反映動物體的健康狀態(tài)�；诖�，本研究首先利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，外源表達(dá)獲得鼠IFN-和IL-10兩種重組細(xì)胞因子。利用這兩種重組細(xì)胞因子免疫小鼠，通過細(xì)胞融合以及亞克隆技術(shù)得到了能穩(wěn)定分泌IFN-和IL-10的雜交瘤細(xì)胞�？傊�，本實驗得到了鼠的IFN-、IL-10細(xì)胞因子蛋白以及相應(yīng)的抗體，為進(jìn)一步研究其結(jié)構(gòu)和功能奠定了基矗篩選得到的雜交瘤細(xì)胞，也是后續(xù)建立雙抗夾心ELISA檢測方法的關(guān)鍵。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]水牛IFN-γ克隆表達(dá)及其單克隆抗體的制備與應(yīng)用[D]. 鄒新峰.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
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本文編號：3090443