目的:構(gòu)建長鏈非編碼RNA AC073934.6（lncRNA-AC）的慢病毒質(zhì)粒,在HEY和HeLa細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá),并觀察其對(duì)鄰近基因SND1表達(dá)的影響。方法:提取基因組DNA,擴(kuò)增出lncRNA-AC外顯子1（F1R1）和外顯子2（F2R2）,化學(xué)合成外顯子3（F3R3）。利用重疊延伸PCR獲得上述3個(gè)DNA片段的連接產(chǎn)物（F1R3）;通過同源重組的方法將F1R3和慢病毒載體pLVXIRES-Puro連接起來,構(gòu)建pLVX-lncRNA-AC重組質(zhì)粒。用慢病毒包裝的方法獲得過表達(dá)lncRNA-AC的慢病毒,隨后感染HEY和HeLa細(xì)胞系,PCR檢測lncRNA-AC的轉(zhuǎn)錄,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western印跡檢測SND1表達(dá)。結(jié)果:通過菌液PCR和測序驗(yàn)證了重組質(zhì)粒pLVX-lncRNA-AC構(gòu)建成功;利用慢病毒感染細(xì)胞后,通過PCR檢測過表達(dá)lncRNA-AC的穩(wěn)定株構(gòu)建成功;在穩(wěn)定株中通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測SND1的mRNA水平,在HEY細(xì)胞系中,WT和過表達(dá)lncRNA-AC后SND1的mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為1.00±0.14和1.24±0.19,兩者比較,差異無... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,26(06)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

Lnc RNA-AC質(zhì)粒構(gòu)建示意圖

Lnc RNA-AC和SND1基因的位置關(guān)系

Lnc RNA-AC的目的片段

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3090209