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生物合成10-HDA關(guān)鍵酶分子的克隆及工程菌構(gòu)建研究

發(fā)布時(shí)間:2021-03-07 11:42
  10-羥基-2-癸烯酸(10-HDA)是一種同時(shí)具有雙鍵、羥基的中鏈脂肪酸衍生物,僅存在蜂王漿中,具有抗菌、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、神經(jīng)調(diào)節(jié)、抗癌、抗腫瘤等作用,有很高的藥用價(jià)值。目前10-HDA來(lái)源單一,直接提取法難以滿足需求;化學(xué)合成法具有不可避免的缺點(diǎn),比如:生產(chǎn)條件苛刻,易產(chǎn)生污染等,所以需要探求新的合成方法。分析其結(jié)構(gòu)式可知羥基和雙鍵是其中兩個(gè)特殊的官能團(tuán),明確這兩個(gè)官能團(tuán)的形成過(guò)程對(duì)研究10-HDA的生物合成具有重要意義。本研究提出了構(gòu)建10-HDA生物合成途徑思路,即以癸酸為底物,在P450酶的作用下末端羥基化生成10-羥基癸酸,10-羥基癸酸在硫激酶的作用下加上輔酶A,然后在脂酰輔酶A脫氫酶的作用下在Cα和Cβ處脫掉兩個(gè)氫原子形成反式雙鍵,至此ω羥基和雙鍵均形成。最后在硫酯酶的作用下脫掉輔酶A,形成10-HDA。(1)本實(shí)驗(yàn)首先克隆了四種來(lái)源的細(xì)胞色素P450酶:來(lái)自于巨大芽孢桿菌的細(xì)胞色素P450酶P450BM3,來(lái)自于枯草芽孢桿菌的細(xì)胞色素P450酶CYP102A1,來(lái)自于熱帶假絲酵母的細(xì)胞色素P450酶CY... 

【文章來(lái)源】:齊魯工業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】:76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

生物合成10-HDA關(guān)鍵酶分子的克隆及工程菌構(gòu)建研究


0-HDA的結(jié)構(gòu)式

細(xì)胞色素P450,黃素,血紅素,突變酶


全部可以對(duì)脂肪酸進(jìn)行羥基化,底物主要是中鏈的不飽和脂肪酸。催化位置主要在 ω-1、ω酶發(fā)生羥基化反應(yīng)的過(guò)程中有兩個(gè)特點(diǎn):一催化底物的速度不同,且差距很大;二是細(xì)體專(zhuān)一性。目前研究比較多的細(xì)胞色素 P450 素 P450 酶 P450BM3。研究表明,未經(jīng)改造的和或不飽和脂肪酸具有催化作用,對(duì)其進(jìn)行,對(duì)烷烴、環(huán)烷烴等均有活性。Carmichal[39]水性位點(diǎn)(R47L/Y51F),這兩個(gè)突變酶對(duì)環(huán)芳烴]等利用理性設(shè)計(jì)和定向進(jìn)化相結(jié)合的方8Q,R47L/A74G/F87V/L188Q, V26T/R47F/到了擴(kuò)展。其中第一個(gè)突變酶具有更廣泛的底烷等生成相應(yīng)的羥基化產(chǎn)物,且催化活性提子耦合率也提高了數(shù)百倍。來(lái)自枯草芽孢桿菌似性。

不飽和脂肪酸,新方法,羥基脂肪酸


圖 1.3 合成 α,β-不飽和脂肪酸的新方法Fig.1.3 The new method of synthesis α, β-unsaturated carboxylic acids肪酸的應(yīng)用酸的特性來(lái)源于其中的羥基,因具有羥基而得名,研究表的分子比非羥基脂肪酸反應(yīng)活性更高。末端羥基脂肪酸可以業(yè)和醫(yī)藥意義的各種工業(yè)產(chǎn)品,包括粘合劑、潤(rùn)滑劑、化妝癌劑[66,67]。中長(zhǎng)鏈末端羥基脂肪酸衍生物可作為合成具有生物塑料等聚合物的原材料[68,69]。這些聚合材料與別的生,具有極大的優(yōu)越性,是至今為止最理性的生物可降解材合物對(duì)撞擊、高溫、化學(xué)腐蝕等具有更高的耐受性,而且解、生物相容性較好,植入體內(nèi)后引起的組織學(xué)反應(yīng)非常端羥基脂肪酸與其衍生物對(duì)腫瘤細(xì)的生長(zhǎng)具有抑制作用,具抑制效果與碳鏈的數(shù)目和不飽和度息息相關(guān)。這就要求大量

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
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碩士論文
[1]蜜蜂細(xì)胞色素P450基因的表達(dá)與功能研究[D]. 武雪龍.齊魯工業(yè)大學(xué) 2017



本文編號(hào):3069023

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