發(fā)布時間：2021-03-06 00:22

　　研究背景:血管內(nèi)皮生長因子A（Vascular endothelial growth factor A,VEGF-A）在血管生成的調(diào)控中起到關鍵作用。VEGF-A包括多種亞型。起初,人們認為不同的VEGF-A亞型是通過VEGF-A的mRNA的可變剪切產(chǎn)生,且這些亞型在血管生成的過程中起到各異的調(diào)節(jié)作用,包括促進血管生成和拮抗血管生成兩個方面。它們也因此被命名為VEGFxxxa或者VEGFxxxb,例如VEGF165b,VEGF121a等。其中“xxx”代表最終蛋白質(zhì)序列中存在的氨基酸數(shù)量,而“a/b”代表VEGF-A基因6號染色體第8外顯子的不同片段:CDKPRR/SLTRKD。最近有研究發(fā)現(xiàn),VEGF-A 的 mRNA 程序性翻譯通讀（programmed translational readthrough,PTR）過程可以產(chǎn)生一種新的VEGF-A亞型,這種亞型使用非經(jīng)典終止密碼子在VEGF-A基因的羧基末端產(chǎn)生一段包含22個氨基酸的延伸,因此被命名為VEGF-Ax,x代表“extend”。有意思的是,VEGF-Ax的功能尚未定論,特別是關于VEGF-Ax調(diào)節(jié)血管生成的結(jié)論是矛盾的。... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２大鼠ＢＭＭＳＣｓ表面特異性標記物

?第１章大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞提取以及過表達ＶＥＧＦ－Ａｘ模型的建立???１???麵，??■■■??Ｍ０Ｉ＝１?Ｍ０Ｉ＝５?Ｍ０Ｉ＝１０?Ｍ０Ｉ＝２０??圖５大鼠ＶＥＧＦ－Ａｘ過表達慢病毒最佳�。郑桑希驕y定。轉(zhuǎn)染７２小時Ｇ各組細胞芡光農(nóng)達水平??轉(zhuǎn)染效率隨著ＭＯＩ增加而增強，當Ｍ０丨為２０的時候己經(jīng)能得到滿意的熒光表達。當ＭＯＩ??泄＇？?２０時，轉(zhuǎn)染效率較差。??Ｆｉｇ?５．?Ｏｐｔｉｍａｌ?．ＭＯＩ?ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｒａｔ?Ｖ?ＥＧＦ－Ａｘ?ｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ?ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ．?７２?ｈｏｕｒｓ??ａｆｔｅｒ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ，?ｔｈｅ?Ｈｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?ｃｅｌｌｓ?ｉｎ?ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ．?Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ??ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ?ｉｎｃｒｅａｓｅｄ?ｗｉｔｈ?ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ?ＭＯＩ．?Ｗｈｅｎ?ｔｈｅ?ＭＯＩ?ｉｓ?２０，?ｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｙ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ??ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｈａｓ?ｂｅｅｎ?ｏｂｔａｉｎｅｄ．?Ｗｈｅｎ?ｔｈｅ?ＭＯＩ?ｉｓ?ｌｅｓｓ?ｔｈａｎ?２０，?ｔｈｅ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ?ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ?ｉｓ??ｐｏｏｒ．??３．２．３過表達慢病毒的轉(zhuǎn)染及驗證??鑒于千細胞轉(zhuǎn)染慢病毒存在一定的難度。我們用慢病毒轉(zhuǎn)染大鼠??ＢＭＭＳＣｓｌ２小時后，再用嘌呤霉素連續(xù)篩選４８小時，７２小時細胞熒光表達效??率大于９５％?（圖６），結(jié)合明場與焚光情況可知，大鼠ＢＭＭＳＣｓ狀態(tài)良好，長??梭形生長，均勻分布；慢病毒轉(zhuǎn)染效率高，ＧＦＰ熒光均一。慢病毒成功轉(zhuǎn)染

?博士學位論文???＿氣??．．Ｃ??圓Ｒｉ??ＬＶ－ＶＥＧＦ－Ａｘ?Ｓｃｒａｍｂｌｅ??圖６過表達慢病毒的轉(zhuǎn)染。以ＭＯ丨＝２０摶染慢病存７２小財后實驗纟丨ｌ?４陰性對照纟丨〖細胞明場??Ｆ細胞形態(tài)１?Ｊ熒光顯微鏡Ｋ熒光及達水個（４０Ｘ）。＂Ｊ？阽細胞狀態(tài)Ｑ好，矜染效韋Ａ。??Ｆｉｇ?６．?Ｆｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ?Ｉｃｎｔｉｖｉｒｕｓｅｓ．?７２?ｈｏｕｒｓ?ａｆｔｅｒ??ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ?ｏｆｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ?ｗｉｔｈ?Ｍ（）Ｉ＝２０．?ｔｈｅ?ｃｅｌｌ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ｔｈｅ??ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ?ｕｎｄｅｒ?ｂｒｉｇｈｔ?ｆｉｅｌｄ?ａｎｄ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌ?ｕｎｄｅｒ?ａ??ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ?（４０Ｘ）．?Ｉｔ?ｃａｎ?ｂｅ?ｓｅｅｎ?ｔｈａｔ?ｔｈｅ?ｃｅｌｌｓ?ａｒｅ?ｉｎ?ｇｏｏｄ?ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｔｈｅ??ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ?ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ?ｉｓ?ｈｉｇｌｉ．??接下來，因為ＶＥＧＦ－Ａ各亞型之間的高度同源性，抗體往往不能特異性識??別某一種亞型。因為抗體識別的是蛋白上特定的抗原決定簇，ＶＥＧＦ－Ａ眾多亞型??中的抗原決定簇都是一致的。因此我們在前期做了很多鑒別工作。為了證明過??２９??


本文編號：3066113