隱花色素（cryptochrome）基因家族作為藍光受體的一大類,廣泛存在于動植物體內(nèi),介導(dǎo)了植物和動物的各種光響應(yīng)。文章通過實驗克隆出球等鞭金藻（Isochrysis galbana）一條隱花色素基因,該基因DNA全長2916 bp,cDNA全長2316 bp,由771個氨基酸組成。對其進行相關(guān)生信分析,預(yù)測該基因是球等鞭金藻Cry1基因（文中稱為Cry1-like基因）,克隆得到的Cry1-like基因能夠為后續(xù)球等鞭金藻隱花色素基因結(jié)構(gòu)與功能研究提供依據(jù)。 

【文章來源】：福建輕紡. 2020,(01)

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

PMD-Cry1-like質(zhì)粒電泳圖

測使用NCBI的CDD數(shù)據(jù)庫(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/cdd/)；同源序列查找使用NCBI的BLAST程序(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)；蛋白質(zhì)同源序列比對采用Clustalx軟件，比對結(jié)果優(yōu)化使用DANman軟件；MEGA7軟件以最大似然法（Maximumlikelihood）構(gòu)建進化樹，分支置信度經(jīng)1000次自舉重復(fù)測驗。2結(jié)果與分析2.1以球等鞭金藻基因組DNA為模板的PCR擴增結(jié)果以球等鞭金藻基因組DNA為模板對進行PCR擴增，經(jīng)電泳檢測，與5000bpLadderMarker進行比較，可見擴增片段約為3000bp，與基因組DNA序列大小吻合，見圖1。2.2PMD19-T克隆后檢測結(jié)果PMD19-T載體大小為2692bp，與片段大小為2916bp的PCR擴增產(chǎn)物連接后重組質(zhì)粒大小約為5700bp。PMD19-T與基因重組質(zhì)粒（下文稱PMD-Cry1-like質(zhì)粒）凝膠電泳圖顯示重組質(zhì)粒片段大小與預(yù)期一致（圖2），基因成功連接至PMD19-T質(zhì)粒上。將PMD-Cry1-like質(zhì)粒送測序，測序結(jié)果與球等鞭金藻DNA全長序列比對，兩者序列一致，通過PCR方式順利克隆得到DNA全長。2.3重疊延伸PCR獲取基因cDNA全長以球等鞭金藻cDNA為模板對基因圖2PMD-Cry1-like質(zhì)粒電泳圖Lane1、2：PMD-Cry1-like，M：SupercoiledDNALadderMarker圖1球等鞭金藻基因PCR產(chǎn)物電泳圖Lane1、2、3：基因PCR產(chǎn)物，M：5000bpLDMarker論文龔林，趙靖悅，雷娜娜，胡榮飛，等：球等鞭金藻基因克隆及生物信息學(xué)分析

げ庠誚湍鋼斜澩锏陌胨テ?大于20h，在大腸桿菌中表達的半衰期大于l0h，而在哺乳動物網(wǎng)狀細胞中體外培養(yǎng)表達的半衰期為30h。該蛋白由20種基本氨基酸組成，含量較高的氨基酸殘基是丙氨酸（Ala，11.8%）和亮氨酸（Leu，11.0%），表1重疊延伸PCR各分段引物引物名稱(Primername)1F/R2F/R3F/R上游引物(5"-3")Forwordprimer(5"-3")ATGCGTGTCGAGCTTTTCGTGAAGCGATTCGAATGAAGCGATCACTTACTGTCGGCCAAACCT下游引物(5"-3")Reverseprimer(5"-3")GCTTCATTCGAATCGCTTGTCGGTTTGGCCGACAGTAAGTGCTCAGCGCATATACTTCTTTATGCTG圖3splign程序比對球等鞭金藻Cry1-like基因DNA和cDNA全長序列Lane1、2、3：CRY1-like基因分段3、2、1PCR產(chǎn)物M：5000bpLDMarkerLane1、2：CRY1-like基因分段1+2、1+2+3PCR產(chǎn)物M：5000bpLDMarker圖4球等鞭金藻CRY1-like基因cDNA各分段PCR產(chǎn)物圖5cDNA各分段重疊延伸PCR產(chǎn)物論文福建輕紡2020年1月第1期

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3062717