禽腺病毒血清4型（FAd V-4）是雙鏈DNA病毒,基因組全長(zhǎng)約43 kb,主要感染3～6周齡肉雞,引起心包積水-肝炎綜合征（HHS）,具有很強(qiáng)的傳染性和致病性。自2014年以來,該病在我國(guó)呈暴發(fā)式流行,給養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。2016年起,廣西多地養(yǎng)雞場(chǎng)開始出現(xiàn)疑似該病的感染,但FAd V-4在廣西地區(qū)的流行情況和對(duì)細(xì)胞因子影響的分析卻鮮有報(bào)道。本研究從廣西某養(yǎng)雞場(chǎng)疑似FAd V-4感染的雞肝臟中分離并鑒定出1株FAd V-4分離株FAd V-4-GX2017-005。對(duì)該毒株進(jìn)行動(dòng)物回歸試驗(yàn)和全基因測(cè)序分析,并進(jìn)一步用該毒株感染雞胚肝細(xì)胞及SPF雞,探究其對(duì)細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平的影響,為了解FAd V-4的流行情況提供數(shù)據(jù)參考,同時(shí)也為防控FAd V-4奠定基礎(chǔ)。具體研究?jī)?nèi)容如下:本研究從廣西地區(qū)疑似感染FAd V-4雞中采集肝臟組織,經(jīng)雞胚肝細(xì)胞傳代分離病毒、蝕斑純化、再經(jīng)FAd V-4 PCR鑒定、組織半數(shù)感染量測(cè)定和血清中和試驗(yàn)鑒定、動(dòng)物回歸試驗(yàn)等驗(yàn)證。PCR結(jié)果顯示該毒株FAd V-4呈陽性,其他常見病原PCR檢測(cè)結(jié)果為陰性;測(cè)序結(jié)果顯示該毒株為FAd V-4,命名為:FA... 

【文章來源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

FAdV-4分離株感染CEL

廣西大學(xué)碩士學(xué)位論文FAdV-4廣西分離株全基因測(cè)序分析及其感染CEL和SPF雞對(duì)細(xì)胞因子mRNA轉(zhuǎn)錄水平影響的研究16A:對(duì)照組;B:FAdV-4分離株的蝕斑A:Control;B:TheplaquemorphologyofFAdV-4isolated圖2-2FAdV-4廣西分離株在CEL上的蝕斑純化Fig.2-2TheplaquemorphologyofGuangxiisolatedstrainFAdV-4-GX2017-005inCEL2.3.3病毒的鑒定對(duì)純化后增殖的病毒液提取DNA和cDNA進(jìn)行PCR鑒定，擴(kuò)增產(chǎn)物與目的片段大小相符，REV、AIV（H5）、AIV（H7）、AIV（H9）、NDV、IBV、CIAV、ARV、IBDV、MDV和陰性尿囊液均不出現(xiàn)特異性擴(kuò)增（圖2-3）。將目的片段進(jìn)行回收，克隆鑒定后測(cè)序，測(cè)序結(jié)果通過NCBI進(jìn)行BLAST驗(yàn)證，表明為FAdV-4序列，將分離的毒株命名為FAdV-4-GX2017-005。M:100bpDNA分子量標(biāo)準(zhǔn)；1.FAdV-4；2.陰性對(duì)照；3.AEV；4.AIV（H5）；5.AIV（H7）；6.AIV（H9）；7.NDV；8.IBV；9.CIAV；10.ARV；11.IBDV；12.MDVM:100bpDNALadder(DyePlus);1.PCRproductofpositiveFAdV-4;2.Negativecontrol;3.AEV;4.AIV(H5);5.AIV(H7);6.AIV(H9);7.NDV;8.IBV;9.CIAV;10.ARV;11.IBDV;12.MDV圖2-3分離株FAdV-4PCR鑒定Fig.2-3PCRamplificationofDNAfragmentforFAdV-4isolate

廣西大學(xué)碩士學(xué)位論文FAdV-4廣西分離株全基因測(cè)序分析及其感染CEL和SPF雞對(duì)細(xì)胞因子mRNA轉(zhuǎn)錄水平影響的研究18基因的目的條帶，表明FAdV-4-GX2017-005成功感染SPF雞；病死雞肝臟中也能檢測(cè)到病毒hexon。每組的感染率和感染后的生存情況結(jié)果見表2-4和圖2-4。A組3dpi出現(xiàn)呼吸困難、閉眼嗜睡等癥狀，5dpi內(nèi)全部死亡；B組4dpi出現(xiàn)采食量減少、拉黃綠色稀糞的臨床癥狀，5、6dpi共有5只SPF雞死亡，7dpi時(shí)雞群狀況開始恢復(fù)，14dpi時(shí)與對(duì)照組無明顯差異；C組部分SPF雞只6dpi出現(xiàn)羽毛松亂的癥狀，6dpi時(shí)有1只SPF雞死亡；D組在整個(gè)感染期間沒有出現(xiàn)臨床癥狀。臨床癥狀結(jié)果見圖2-5。對(duì)病死雞及B組感染后第5天的活雞進(jìn)行剖檢均可見有明顯的心包積水，肝臟腫脹、表面紅黃色、質(zhì)脆，腎臟腫脹蒼白，如圖2-6（A~F），該剖檢癥狀與自然感染發(fā)病的雞的剖檢癥狀一致。故后期試驗(yàn)采用105.5TCID50經(jīng)滴鼻點(diǎn)眼途徑感染SPF雞。表2-4FAdV-4-GX2017-005感染SPF雞后泄殖腔棉拭子病毒PCR檢測(cè)情況Table2-4FAdV-4-GX2017-005PCRdetectionofcloacalswabvirusafterSPFchickeninfection分組接種劑量（0.2ml）PCR鑒定陽性比例PositiverateGroupsDose1dpi2dpi3dpi4dpi5dpi6dpi7dpi10dpi14dpiA106.5TCID5010/2010/1010/108/88/8B105.5TCID5010/1010/1010/1010/1010/107/75/55/55/5C104.5TCID5010/1010/1010/1010/1010/1010/109/99/99/9D103.5TCID5010/1010/1010/1010/1010/1010/1010/1010/1010/10EPBS---------圖2-4FAdV-4-GX2017-005不同攻毒劑量的存活率Fig.2-4FAdV-4-GX2017-005survivalrateofdifferentattackingdose

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]細(xì)胞因子與細(xì)胞因子風(fēng)暴[J]. 王玉亮,王峰,耿潔.  天津醫(yī)藥. 2020(06)
[2]慢性牙周炎外周血白細(xì)胞介素6和白細(xì)胞介素8水平及其與疾病嚴(yán)重程度的關(guān)系[J]. 王倩倩.  山西醫(yī)藥雜志. 2020(01)
[3]人工感染禽腺病毒血清4型對(duì)鵝天然免疫反應(yīng)的影響[J]. 李雪峰,姜磊,孫金艷,李慧昕,馬得瑩.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2020(02)
[4]黑龍江省Ⅰ群4型禽腺病毒分離鑒定及致病性試驗(yàn)[J]. 朱慶賀,王爽,張莎,張鵬宇,陳曦,楊旭東,王觀悅,史同瑞.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2019(10)
[5]犬細(xì)小病毒的生物信息學(xué)分析[J]. 魏玲,楊國(guó)淋,王懷禹,李彩虹.  中國(guó)畜禽種業(yè). 2019(10)
[6]白細(xì)胞介素6、白細(xì)胞介素15與疾病相關(guān)性的研究進(jìn)展[J]. 林宗斌,馮喜英,久太,劉洪千.  中華肺部疾病雜志(電子版). 2018(04)
[7]DON、ZEA聯(lián)合染毒對(duì)體外培養(yǎng)雞脾臟淋巴細(xì)胞分泌IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的影響[J]. 張卓,辜彥霏,陽莎莎,王亞超,鄧俊良,任志華.  浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2018(07)
[8]禽腺病毒4型感染病理組織學(xué)觀察[J]. 陳萍,朱佳佳,馬曉勇,張姍,經(jīng)美,崔元,董世山,陳立功,劉聚祥,孫繼國(guó),袁萬哲.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2017(09)
[9]禽腺病毒血清4型的分離鑒定及遺傳演化分析[J]. 王娟,劉亮亮,李慧昕,韓宗璽,劉勝旺.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2017(06)
[10]禽腺病毒4型河南株Hexon全基因的克隆及遺傳進(jìn)化分析[J]. 張宇,喬涵,徐朋麗,楊興武,韓昊瑩,陳紅英.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2017(06)

碩士論文
[1]Ⅰ群禽腺病毒血清4型的分離鑒定及其對(duì)雞肝臟AvBDs、IL-1β和IL-6基因表達(dá)的影響[D]. 張真真.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]禽腺病毒血清4型的分離鑒定及環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)診斷方法的建立[D]. 白元斌.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017
[3]禽呼腸孤病毒感染對(duì)體外細(xì)胞和SPF雞細(xì)胞因子mRNA轉(zhuǎn)錄影響的初步研究[D]. 張昆麗.廣西大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3061968