【目的】篩選不同非生物脅迫下芒根組織中穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)參基因,并為調(diào)控芒根組織中基因表達(dá)提供理論依據(jù)�！痉椒ā恳悦ⅲ∕iscanthus sinensis）根組織為試驗(yàn)材料,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)12個(gè)候選內(nèi)參基因在不同非生物脅迫環(huán)境（干旱、鹽、鎘、鉻和砷）下的表達(dá)情況,并運(yùn)用geNorm、BestKeeper、NormFinder和RefFinder軟件分析它們?cè)诿⒏M織中的穩(wěn)定性�！窘Y(jié)果】在不同的非生物環(huán)境脅迫條件下,最穩(wěn)定的內(nèi)參基因各不相同。12個(gè)內(nèi)參基因表達(dá)穩(wěn)定性由高到低排序?yàn)?Unigene26576,Unigene33024,Sb02g041180,eIF4A,ACTIN,GAPDH,Unigene33312,Sb09g019750,PP2A,SAMDC,18S rRNA,SAMS。其中在干旱脅迫條件下,Sb02g041180和ACTIN基因最穩(wěn)定;在鹽脅迫和砷脅迫處理下最穩(wěn)定的內(nèi)參基因分別是Sb09g019750和Unigene26576、Sb09g019750和PP2A;鎘和鉻脅迫下最穩(wěn)定的內(nèi)參基因分別為Unigene26576和PP2A、Sb09g019750和U... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,38(06)北大核心

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

12個(gè)候選內(nèi)參基因PCR擴(kuò)增結(jié)果

候選內(nèi)參基因在不同非生物脅迫環(huán)境下的平均Ct值

ge Norm軟件分析結(jié)果顯示：在鉻脅迫處理下，所有候選內(nèi)參基因的M值都小于1.5，表明12個(gè)候選內(nèi)參基因均能穩(wěn)定表達(dá)，穩(wěn)定性排名前兩位的內(nèi)參基因?yàn)镻P2A和Sb09g019750；在干旱脅迫和鹽脅迫下，表達(dá)最穩(wěn)定的內(nèi)參基因分別為Unigene33024和Unigene26576、Unigene26576和Sb09g019750；在重金屬鎘脅迫和重金屬砷脅迫處理下，表達(dá)最穩(wěn)定的內(nèi)參基因分別是PP2A和Unigene26576、PP2A和Sb09g019750；而在考慮所有樣本的情況下，表達(dá)最穩(wěn)定的內(nèi)參基因?yàn)閁nigene26576和Unigene33024（圖3）。此外，ge Norm程序還能基于成對(duì)變異分析確定所需的最佳內(nèi)參基因數(shù)量。ge Norm軟件可用于分析內(nèi)參基因的配對(duì)差異值（Vn/Vn+1），軟件分析默認(rèn)值為0.15。當(dāng)Vn/Vn+1大于0.15時(shí)，需要引入第n+1基因；當(dāng)Vn/Vn+1小于0.15時(shí)，無須引入新的內(nèi)參基因[19]。本次試驗(yàn)中，所有樣品的V2/3小于0.15，則該試驗(yàn)條件下的最適內(nèi)參基因數(shù)目是2個(gè)。鉻脅迫下的成對(duì)變異（V2/3）小于0.15，表明使用兩個(gè)最穩(wěn)定的內(nèi)參基因（PP2A和Sb09g019750）可以足夠。干旱脅迫、鎘脅迫、砷脅迫、鹽脅迫的成對(duì)變異（V3/4）均大于0.15，這表明可能需要4個(gè)內(nèi)參基因來進(jìn)行精確的歸一化（圖4）。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3060606