等溫擴(kuò)增技術(shù)操作簡單,能夠在恒定溫度下實現(xiàn)核酸擴(kuò)增過程,對溫度控制要求較低,很好地彌補(bǔ)了傳統(tǒng)的聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）的不足,因此,在病原體和miRNA檢測,單核苷酸多態(tài)性,DNA甲基化等核酸分析中的應(yīng)用得到了快速發(fā)展。隨著適配體,DNAzyme等功能核酸分子的引入,等溫擴(kuò)增技術(shù)的應(yīng)用范圍已經(jīng)拓展到了蛋白,細(xì)胞,功能小分子,金屬離子等分析檢測領(lǐng)域。目前,已經(jīng)建立了很多種等溫擴(kuò)增技術(shù),其中基于滾環(huán)擴(kuò)增（RCA）和切刻酶輔助的等溫擴(kuò)增技術(shù),設(shè)計和擴(kuò)增體系簡單,靈活性和可操作性很強(qiáng),易于和其他的信號放大技術(shù)和檢測體系整合在一起,因此,廣泛應(yīng)用于各種類型的生化分析體系。本論文圍繞基于等溫擴(kuò)增技術(shù)和功能核酸分子的生化分析體系展開,主要包括以下五部分:第一章首先簡要介紹了常用的各類等溫擴(kuò)增技術(shù)的原理和應(yīng)用。然后總結(jié)了基于等溫擴(kuò)增技術(shù)的生化分析中常用的功能核酸分子和信號讀出手段。最后著重介紹了基于RCA和切刻酶輔助的等溫擴(kuò)增技術(shù)在各類分析物檢測中的應(yīng)用以及在實際樣本檢測中的問題,并在此基礎(chǔ)上,提出了本論文的研究思路和主要內(nèi)容。在第二章中,我們結(jié)合切刻酶輔助的鏈置換擴(kuò)增和指數(shù)滾環(huán)擴(kuò)增,設(shè)計了一種簡單的等... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：133 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１線性滾環(huán)擴(kuò)增的原理示意圖［９］??Ｆｉ．?１．１?Ｓｃｈｅｍｅ?ｏｆ?ｔｈｅｒｉｎｃｉｌｅ?ｆｏｒ?ｌｉｎｅａｒ?ＲＣＡ｜ｌ）１??

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形成的具有特殊結(jié)構(gòu)的功能核酸分子Ｐ１。不同于按照堿基互補(bǔ)配對原則形成的雙螺旋結(jié)構(gòu)，??富含鳥嘌呤的寡核苷酸傾向于通過特殊的折疊方式形成四螺旋體結(jié)構(gòu)。Ｇ－四鏈體的基本結(jié)??構(gòu)單元是由四個鳥嘌呤通過Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ氫鍵形成的Ｇ－四分體（圖１．４），然后通過７ｔ－７ｉ堆??積相互作用形成四鏈體結(jié)構(gòu)［２８’２９］。Ｇ－四鏈體中心孔道帶負(fù)電荷，金屬離子能夠嵌入其中。??基于金屬離子對Ｇ－四鏈體結(jié)構(gòu)和性能的影響，研究人員設(shè)計了各種不同的策略用于金屬??離子檢測。Ｓｅｎ等［３（）］提出：Ｇ－四鏈體和血晶素可以形成復(fù)合物，該復(fù)合物具有顯著的類過??氧化物酶活性。與天然存在的過氧化物酶相比，ＤＮＡｚｙｍｅ性質(zhì)穩(wěn)定，易于合成修飾，設(shè)??計靈活，在生化分析領(lǐng)域顯示出很好的應(yīng)用前景。例如，利用Ｇ－四鏈體和血晶素構(gòu)成的??ＤＮＡｚｙｍｅ的類過氧化物酶活性，可以催化Ｈ２０２與ＴＭＢ（?３，３＇，５，５，－四甲基聯(lián)苯胺）或ＡＢＴＳ２－??（２，２＇－連氮基－雙－（３－乙基苯并二氫噻唑啉－６－磺酸）二銨鹽）的比色反應(yīng)，用于比色分析??中的信號輸出；同時

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3053056