目的將攜帶人凝血因子IX（h FIX）基因（F9）的重組腺病毒轉(zhuǎn)染C57BL/6小鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（adipose-derived stem cell,ADSC）,經(jīng)過傳代培養(yǎng)后,觀察F9是否在ADSC中穩(wěn)定表達(dá),探索ADSC是否可作為血友病基因治療的載體細(xì)胞。方法取C57BL/6小鼠腹股溝區(qū)脂肪,依據(jù)組織塊懸浮法分離培養(yǎng)小鼠ADSC并進(jìn)行傳代培養(yǎng),應(yīng)用攜帶h FIX基因并含GFP熒光標(biāo)記的重組腺病毒轉(zhuǎn)染第3代ADSC,轉(zhuǎn)染后再次進(jìn)行傳代培養(yǎng)至第4、5代細(xì)胞。熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞攜帶熒光數(shù)量,RT-PCR檢測F9基因表達(dá),ELISA法檢測細(xì)胞上清液及Western Blot檢測細(xì)胞內(nèi)攜帶目的基因表達(dá)蛋白情況。結(jié)果 （1）重組腺病毒轉(zhuǎn)染后熒光顯微鏡下可見熒光表達(dá),細(xì)胞傳代后仍具有熒光。（2） RT-PCR結(jié)果顯示:四組ADSC均可表達(dá)內(nèi)參GAPDH基因片段,A、B、C組可檢測到目的基因F9的表達(dá),D組未檢測到F9的表達(dá)。（3） ELISA法檢測凝血因子IX抗原（h FIX:Ag）結(jié)果顯示:A組（81.62±8.82） ng/m L、B組（52.50±3.25） ng/m L、C組（47... 

【文章來源】：中國實驗動物學(xué)報. 2020,28(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

復(fù)蘇后ADSC細(xì)胞生長情況

Ad-F9-GFP轉(zhuǎn)染細(xì)胞及傳代后熒光表達(dá)

重組腺病毒轉(zhuǎn)染ADSC成骨誘導(dǎo)圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]小鼠、大鼠、食蟹猴與人的脂肪干細(xì)胞分離培養(yǎng)方法和生物學(xué)特性的比較分析[J]. 李珂雅,石桂英,高舒平,白琳,秦川.  中國比較醫(yī)學(xué)雜志. 2019(06)
[2]成人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的定向成骨誘導(dǎo)[J]. 郭艷萍,陶常波,張愛君,李雪陽,沈才齊,李政道,金培生.  中國組織工程研究. 2014(19)
[3]轉(zhuǎn)染鼠脂肪干細(xì)胞用于血友病A基因治療的可能性實驗[J]. 李銀華,黃星原,徐之良.  中國臨床康復(fù). 2005(19)



本文編號：3046544