目的:為建立合適卵巢功能研究的細胞模型,本研究比較了人卵巢壁層顆粒細胞（mural granulosa cells,MGCs）與卵丘細胞（cumulus cells,CCs）體外分離及原代培養(yǎng)的效果。方法:收集16例行輔助生殖技術(shù)治療患者取卵日的卵泡液及其卵丘-卵母細胞復(fù)合物（223個）,采用密度梯度離心法分離MGCs,機械切割法+酶解法分離CCs。應(yīng)用臺盼藍染色法比較CCs與MGCs的細胞總數(shù)和存活率,通過流式細胞術(shù)檢測卵泡刺激素受體（follicle stimulating hormone receptor,FSHR）的表達來鑒定CCs與MGCs的細胞純度,qPCR和Western blot方法檢測微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3）、P62和Bax mRNA和蛋白的表達水平。結(jié)果:與MGCs相比,CCs的分離耗時少,細胞存活率高（P<0.05）,體外培養(yǎng)的細胞延展性好;流式細胞術(shù)顯示分離后的CCs與MGCs的FSHR表達量分別為（92.23±2.66）%和（81.33±6.57）%,差異... 

【文章來源】：中國病理生理雜志. 2020,36(12)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    1 顆粒細胞來源
    2 主要試劑
    3 方法
        3.1 MGCs和CCs的分離
            3.1.1 MGCs的分離
            3.1.2 CCs的分離
        3.2 細胞計數(shù)與存活率檢測
        3.3 細胞原代培養(yǎng)、細胞爬片與HE染色
        3.4 細胞純度鑒定
        3.5 LC3、P62和Bax m RNA的q PCR檢測
        3.6 LC3、P62和Bax蛋白的Western blot檢測
    4 統(tǒng)計學(xué)處理
結(jié)果
    1 MGCs和CCs的分離耗時、細胞總數(shù)及存活率
    2 MGCs和CCs的細胞純度
    3 MGCs和CCs體外原代培養(yǎng)的生長狀態(tài)
    4 LC3、P62、Bax在MGCs與CCs中的m RNA表達水平
    5 LC3、P62和Bax蛋白在MGCs與CCs中的表達水平
討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]細胞自噬與凋亡的交互作用[J]. 付晶晶,段君凱,李紅.  生命的化學(xué). 2014(05)
[2]兩種人卵巢顆粒細胞分離提純方法的比較研究[J]. 江歡,謝寶國,羅琛,李紅,朱偉杰.  生殖與避孕. 2012(11)
[3]人卵丘細胞與卵母細胞發(fā)育及成熟的關(guān)系[J]. 黃鑫,郝翠芳.  生殖與避孕. 2012(08)



本文編號：3045304