DNA甲基化是發(fā)生在基因5′端5′-CpG-3′胞嘧啶上的DNA共價修飾作用,可調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄,與植物的生長、發(fā)育、成熟、衰老有著密切關(guān)系。DNMT2是首先從擬南芥中發(fā)現(xiàn)的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶。該研究通過NCBI序列比對獲得番茄中DNMT2的同源基因SlDNMT2的編碼區(qū)序列;通過Primer5設(shè)計引物,PCR技術(shù)擴增獲得SlDNMT2基因高度特異性序列（長度約500 bp）;利用一系列分子生物學試驗研究方法最終成功構(gòu)建SlDNMT2 RNAi表達載體,并命名為pBI121-35S∷siRNA1-siRNA2。該RNAi表達載體的構(gòu)建為進一步探究SlDNMT2基因在植物生長發(fā)育過程中的功能奠定了一定的理論基礎(chǔ)并提供了一條高效、迅速的載體構(gòu)建途徑。 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)科學. 2020,48(03)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

pBI12135S∷siRNA1-siRNA2酶切鑒定結(jié)果

利用限制性內(nèi)切酶處理pSK-siRNA1-siRNA2陽性菌重組質(zhì)粒和pBI121質(zhì)粒,經(jīng)Omega公司膠回收試劑盒回收siRNA1-siRNA2高度特異性片段,T4 DNA連接酶4 ℃過夜連接,轉(zhuǎn)化DH5α大腸桿菌感受態(tài),陽性菌鑒定,最終得到番茄植株SlDNMT2基因RNAi表達載體,并將該載體重新命名為pBI121-35S∷siRNA1-siRNA2。載體構(gòu)建流程見圖1。2 結(jié)果與分析

通過NCBI網(wǎng)站Blast獲得番茄DNMT2基因的編碼區(qū),其CDS全長為1 146 bp,共編碼381個氨基酸。利用Trizol試劑法提取番茄植物總RNA,質(zhì)量檢測結(jié)果如圖2所示。將SlDNMT2基因氨基酸序列與擬南芥AtDNMT2進行同源性比對分析,結(jié)果顯示番茄SlDNMT2和擬南芥AtDNMT2的同源性達62.05%(圖3)。并選取SlDNMT2基因起始密碼子(ATG)至終止密碼子(TGA)的編碼區(qū),利用SGN-VIGS網(wǎng)站,在Solanum_lycopersicum_ITAG _v2.40資料庫中篩選,最終獲得大小約500 bp的SlDNMT2基因高度特異性序列,并命名為小干擾RNA序列(siRNA)。2.1.2 SlDNMT2基因特異性片段克隆。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]桔小實蠅鈉離子通道基因和P450基因RNAi載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)化[J]. 潘琦,岳建蘇,王翠倫,于士將,周浩楠,楊娟生,侯棟元,成祿艷,冉春.  分子植物育種. 2019(02)
[2]甜菜內(nèi)向整流K+通道BvAKT1基因RNAi載體的構(gòu)建[J]. 伍國強,劉海龍,李勝勝,藺麗媛,謝玲玲.  分子植物育種. 2019(01)



本文編號：3045093