間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells,MSCs）由中胚層成體干細(xì)胞發(fā)育而來,具有自我更新能力,并且在一定條件下可以分化為多種細(xì)胞和組織,如軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞和脂肪細(xì)胞等。MSCs存在于很多組織中,包括脂肪、骨髓、滑膜和肌肉等,來源于骨髓的MSCs叫做骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）。其中,由于BMSCs具有易于獲取、不涉及倫理問題以及相對(duì)簡單的分離和培養(yǎng)、快速的增殖能力和遺傳穩(wěn)定性好、多向分化潛能、免疫原性低以及可移植性高等優(yōu)點(diǎn),使得BMSCs成為廣大科研工作者的研究材料和臨床應(yīng)用上理想的種子細(xì)胞,也使得BMSCs成為基礎(chǔ)研究和轉(zhuǎn)化應(yīng)用中最熱門的一種MSCs。然而,體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有非常有限的增殖潛力,隨著培養(yǎng)過程中傳代次數(shù)增加,BMSCs發(fā)生衰老,BMSCs體外的自我更新能力和多向分化潛能會(huì)發(fā)生下降。BMSCs的衰老極大地限制了其在臨床上的應(yīng)用和療效,特別是阻礙了老年患者自體體細(xì)胞治療的發(fā)展。細(xì)胞衰老（cell senescence;cell aging）,一般情... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．?ＳＧＪ的結(jié)構(gòu)式和分子量

我們應(yīng)用了一個(gè)商業(yè)化的溶酶體探針ＬｙｓｏＴｒａｃｋｅｒ？?Ｒｅｄ?ＤＮＤ－９９，用于定??位溶酶體。利用激光共聚焦顯微鏡，我們發(fā)現(xiàn)ＳＧＪ與溶酶體的共定位系數(shù)是??０．９４，表明了?ＳＧＪ在細(xì)胞中可以特異地靶向溶酶體（圖２）。??Ａ?ＳＧＪ?Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ?Ｍｅｒｇｅ?Ｃｏｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ??■?■麵＾??Ｃｏｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ?＝?０．９４??圖２．?ＳＧＪ特異地靶向溶酶體。（Ａ）用２〇ｙＭ的ＳＧＪ孵育大鼠ＢＭＳＣｓ?ｌｈ，然后??用０．?５ｗＭ的ＬｙｓｏＴｒａｃｋｅｒ？?Ｒｅｄ?ＤＮＤ－９９孵育細(xì)胞３０?ｍｉｎ，用激光掃描共聚焦??顯微鏡觀察ＳＧＪ與溶酶體的共定位情況，計(jì)算共定位系數(shù)。??４３??

響ＢＭＳＣｓ的溶酶體的功能。我們發(fā)現(xiàn)年輕的ＢＭＳＣｓ明顯的被Ａ０染色，然而衰老??的ＢＭＳＣｓ?（ＰＤＬ?２０）中的卻幾乎沒有染色。但是ＳＧＪ卻能夠明顯增加衰老細(xì)胞??的ＢＭＳＣｓ中的Ａ０染色（圖３ａ）。??那么ＳＧＪ是否是通過增加衰老細(xì)胞的溶酶體中的Ｈ＇的濃度，從而使得衰老??細(xì)胞的Ａ０染色增加？為了解決這個(gè)疑問，我們接下來采用了?Ｂａｆ－Ａｌ。Ｂａｆ－Ａｌ??可以抑制是溶酶體膜上的ｖ－ＡＴＰａｓｅ，從而降低溶酶體的酸度。我們分別先用２０??ｎＭ的Ｂａｆ－Ａｌ或２０ｙＭ的ＳＧＪ孵育衰老ＢＭＳＣｓ?（ＰＤＬ?２０）?２４ｈ，再用溶酶體探針??Ｌｙｓｏｓｅｎｓｏｒ？?Ｇｒｅｅｎ?ＤＮＤ－１８９去量化溶酶體中的Ｈ＋濃度。我們發(fā)現(xiàn)Ｂａｆ－Ａ１能夠??明顯的降低酶體中的ＩＴ的濃度，而ＳＧＪ卻能夠顯著的升高溶酶體中｝ｆ的濃度??（圖?３ｂ）。??ＬＡＭＰ１?（?ｌｙｓｏｓｏｒａｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ?ｍｅｍｂｒａｎｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?１?）和?ＬＡＭＰ２??（ｌｙｓｏｓｏｍｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ?ｍｅｍｂｒａｎｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?２）是溶酶體膜上的兩個(gè)蛋白，是??表征溶酶體功能的兩個(gè)標(biāo)志物。我們通過Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測，發(fā)現(xiàn)ＳＧＪ能夠以??ｌｌ、Ｊ？間依賴性的方式上調(diào)衰老ＢＭＳＣｓ中溶酶體的ＬＡＭＰ１和ＬＡＭＰ２的蛋白水平（圖??３ｃ?）。??因此


本文編號(hào)：3020247