α-L-鼠李糖苷酶（EC 3.2.1.40）是一種糖苷水解酶,它能夠特異性水解非還原性末端的鼠李糖基。目前α-L-鼠李糖苷酶廣泛地應(yīng)用于食品、制藥、化工等行業(yè),市場前景廣闊。微生物來源的α-L-鼠李糖苷酶一般都需要誘導物的誘導來促進產(chǎn)酶,但同時還伴隨有β-葡萄糖苷酶產(chǎn)生,混合酶不僅存在純化困難的問題還對后續(xù)應(yīng)用造成不便。因此,得到單一并且催化效率高的α-L-鼠李糖苷酶就顯得十分必要。本課題組前期分離得到一株黑曲霉菌株NCU-317,在進行誘導產(chǎn)α-L-鼠李糖苷酶的同時也有β-葡萄糖苷酶的產(chǎn)生。因此本研究擬通過現(xiàn)代分子生物學技術(shù)構(gòu)建工程菌的方法來解決上述存在的問題。本論文主要結(jié)果如下:1、通過改變文獻廣泛報道的液體搖瓶為固體平板培養(yǎng)方法,提取到了完整的總RNA,隨后采用改進的RACE技術(shù)并結(jié)合設(shè)計了特異性的接頭引物,并充分運用了TdT末端轉(zhuǎn)移酶的性質(zhì),還運用了Nested PCR、Touch-down PCR來提高RACE技術(shù)的穩(wěn)定性和可靠性。經(jīng)過實驗發(fā)現(xiàn)此改良后的RACE法應(yīng)用于黑曲霉中α-L-鼠李糖苷酶基因調(diào)取效果良好。2、以前期得到的黑曲霉NCU-317 cDNA為模板,通過普通P... 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

翻轉(zhuǎn)型和保持型糖苷酶作用機理圖

1.2 α-L-鼠李糖苷酶常見水解底物結(jié)構(gòu)；A：柚皮苷；B：槲皮苷；C：新橙皮苷；D��；E：枸橘苷；F：橘皮苷；G：燕麥皂苷 AFig 1.2 Structures of seven substrates hydrolyzed by α-L-rhamnosidase. A: naringin, B:hesperidin, C: neohesperidin, D: rutin, E: poncirin, F: quercitrin, G: avenacoside A.

表達載體圖示


本文編號：3015686