優(yōu)雅蟈螽Gampsocleis gratiosa Brunner von Wattenwyl隸屬于直翅目Orthoptera螽斯科Tettigoniidae,俗稱蟈蟈。優(yōu)雅蟈螽雄性個(gè)體較大,體型粗壯,容易飼養(yǎng)。其精子形狀似箭頭,頂體復(fù)合體結(jié)構(gòu)復(fù)雜,頂體復(fù)合體之下的細(xì)胞核在光學(xué)顯微鏡下清晰可見(jiàn),是研究螽斯科昆蟲精子形成的理想材料。本文首先通過(guò)基因克隆和生物信息學(xué)手段對(duì)KIF3A（kif3a）和KIF18A（kif18a）進(jìn)行鑒定。其次,應(yīng)用RNA干擾、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、冰凍切片與免疫熒光、石蠟切片片與PAS染色技術(shù)分析kif3a和kif18a基因沉默后對(duì)優(yōu)雅蟈螽精子形成的影響。為研究驅(qū)動(dòng)蛋白在直翅目昆蟲精子形成中的作用奠定基礎(chǔ)。分析比較本實(shí)驗(yàn)室建立的優(yōu)雅蟈螽四個(gè)轉(zhuǎn)錄組中驅(qū)動(dòng)蛋白基因的表達(dá)量,選擇KIF3A和KIF18A作為研究對(duì)象,克隆得到kif3a和kif18a基因,并進(jìn)行生物信息學(xué)分析。Kif3a基因cDNA序列長(zhǎng)3590bp,包括一個(gè)長(zhǎng)2130bp的開(kāi)放閱讀框,編碼709個(gè)氨基酸殘基組成的多肽鏈。預(yù)測(cè)其多肽鏈的分子量為80.33KD,等電點(diǎn)為5.35。Kif18a基因cDNA序列... 

【文章來(lái)源】：河北大學(xué)河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：86 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

驅(qū)動(dòng)蛋白重鏈二聚體結(jié)構(gòu)（馬達(dá)結(jié)構(gòu)域和頸鏈的晶體結(jié)構(gòu)）

NameTestisMale bodyOvaire KIFC1 無(wú) 無(wú) 無(wú) KIFC2 無(wú) 無(wú) 無(wú) KIFC3 無(wú) 無(wú) 無(wú) KIF25 無(wú) 無(wú) 無(wú) 示 FPKM（每千個(gè)堿基的轉(zhuǎn)錄每百萬(wàn)映射讀取的碎片，表征表達(dá)量kif18a 基因在不同組織中 qPCR 結(jié)果的 kif3a 和 kif18a 基因在頭、觸角、精巢、附腺、馬氏管、、肌肉等組織中均有表達(dá)（圖 3-1 和圖 3-2）。KIF3A 在精腺、前胃、中腸、胃盲囊、氣管、頭、馬氏管表達(dá)量降低，1）。KIF18A 也是在精巢中表達(dá)量最高，依次在附腺、中、馬氏管表達(dá)量降低，也是在肌肉中表達(dá)量最低（圖 3-2）

圖 3-2 kif18a 在各個(gè)組織中的表達(dá)量分析. 3-2 RT-qPCR analysis of relative expression of the kif18a in different tve of head; Ne）；精巢（Testis; Te）；附腺（Accessory gland;Ag）；馬氏管（Trachea; Tr）；中腸（Midgut; Mg）；前胃（Forestomach; Fs）；肌肉（Muscle; Mu）A 及 KIF18A 基因及蛋白序列分析結(jié)果、kif18a 基因 cDNA 序列分析室優(yōu)雅蟈螽精巢轉(zhuǎn)錄組分別搜索并獲取優(yōu)雅蟈螽 kif3a 和 kBI 上輸入其序列得到，kif3a 的開(kāi)放閱讀框（ORF）為 213f18a 的 ORF 為 4674bp ，編碼 1557 個(gè)氨基酸。接著用 EXPe 上的 Portparam 程序分析得到 KIF3A 的分子質(zhì)量為 80.33A 的分子質(zhì)量為 171.25KD ，等電點(diǎn)為 8.62 ；其中氨基酸的后用 Bioedit 軟件得到這四種蛋白的氨基酸序列如圖 3-3 和

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]優(yōu)雅蟈螽精子形成期間微絲和微管蛋白的動(dòng)態(tài)變化[J]. 陳杰,王樂(lè),常巖林.  昆蟲學(xué)報(bào). 2018(03)
[2]優(yōu)雅蟈螽精子形成過(guò)程中核的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化觀察（英文）[J]. 王昕,常巖林,趙卓,郭明申.  昆蟲學(xué)報(bào). 2014(10)
[3]暗褐蟈螽與優(yōu)雅蟈螽精子超微結(jié)構(gòu)的比較研究（直翅目,螽斯科）[J]. 常巖林,王莉,郭明申,張小霞.  動(dòng)物分類學(xué)報(bào). 2011(03)
[4]優(yōu)雅蟈螽與暗褐蟈螽精子束的顯微觀察[J]. 王莉,常巖林,馮曉麗,石福明.  昆蟲學(xué)報(bào). 2010(05)
[5]小鼠精子細(xì)胞變態(tài)成形過(guò)程中manchette的免疫熒光染色分析[J]. 郭睿,閆萍,李喜霞,張棟.  解剖學(xué)報(bào). 2008(06)



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