3型視神經(jīng)萎縮（Optic atrophy type 3,OPA3）又被稱為視神經(jīng)萎縮綜合征,是一種常染色體隱性神經(jīng)眼病綜合征,其癥狀包括早發(fā)性雙側(cè)視神經(jīng)萎縮和晚期發(fā)育痙攣。3型視神經(jīng)萎縮是由OPA3蛋白功能缺失引起的。OPA3是由核基因組編碼,定位于線粒體的蛋白質(zhì)。OPA3的同源基因也存在于真菌和植物中。植物中,馬鈴薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）的輔助蛋白酶（Helper component proteinase,HC-Pro）可以幫助馬鈴薯Y病毒入侵植物,影響葉綠體分裂。而番茄OPA3-like蛋白與HC-Pro蛋白在酵母細胞中可以相互作用,同時HC-Pro蛋白與番茄OPA3-like蛋白在洋蔥表皮細胞的質(zhì)膜上也可以互作。因而猜測這兩種蛋白可能存在相關(guān)性。在煙草表皮細胞中,番茄OPA3-like蛋白定位于葉綠體,說明該蛋白可能于葉綠體有關(guān)。目的:通過對番茄OPA3-like（SlOPA3L）基因和煙草OPA3-like（NtOPA3L）基因的研究,初步探究植物OPA3-like基因的功能。方法:使用在線軟件ProtParam、SignalP、SOPMA、ProtS... 

【文章來源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 文獻綜述
    1.1 OPA3 基因的功能研究及現(xiàn)狀
        1.1.1 動物OPA3 基因功能研究
        1.1.2 植物OPA3-like基因和研究
        1.1.3 OPA3 的信息學(xué)分析
        1.1.4 OPA3 的亞細胞定位
    1.2 敲除載體的研究
        1.2.1 CRISPR的序列發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 CRISPR-Cas系統(tǒng)三種類型
        1.2.3 CRISPR-Cas9 編輯系統(tǒng)作用機理
        1.2.4 CRISPR-Cas9 技術(shù)的的應(yīng)用
    1.3 RNAi技術(shù)的研究
        1.3.1 RNAi技術(shù)的起源
        1.3.2 RNAi技術(shù)的原理
        1.3.3 RNAi技術(shù)的應(yīng)用
    1.4 葉綠體的發(fā)育的研究
        1.4.1 葉綠體的起源
        1.4.2 葉綠體參與細胞凋亡
    1.5 研究內(nèi)容及意義
第二章 生物信息學(xué)分析
    2.1 方法
        2.1.1 植物OPA3-like基因序列的獲取
        2.1.2 植物OPA3-like蛋白生物信息學(xué)分析
    2.2 結(jié)果分析
        2.2.1 植物OPA3-like蛋白質(zhì)氨基酸序列比對
        2.2.2 植物OPA3-like蛋白質(zhì)理化性質(zhì)分析
        2.2.3 植物OPA3-like二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
        2.2.4 植物OPA3-like蛋白質(zhì)親水性與跨膜區(qū)預(yù)測
        2.2.5 植物OPA3-like蛋白的亞細胞定位預(yù)測
        2.2.6 植物OPA3-like蛋白信號肽預(yù)測
    2.3 小結(jié)與討論
第三章 植物表達載體的構(gòu)建
    3.1 材料
        3.1.1 實驗載體
        3.1.2 主要實驗儀器
        3.1.3 主要實驗試劑
        3.1.4 培養(yǎng)基的配置
    3.2 方法
        3.2.1 NtOPA3-like基因片段的PCR引物設(shè)計及擴增
        3.2.2 NtOPA3-like基因片段的T載體的構(gòu)建及測序
        3.2.3 SlSg-OPA3 基因敲除載體的構(gòu)建
        3.2.4 NtOPA3-like基因過表達載體的構(gòu)建
        3.2.5 NtOPA3-like基因干擾載體的構(gòu)建
    3.3 結(jié)果分析
        3.3.1 NtOPA3-like基因目標(biāo)片段的獲取及鑒定
        3.3.2 NtOPA3-like基因過表達載體的鑒定
        3.3.3 NtOPA3-like基因干擾載體的鑒定
        3.3.4 Sl OPA3-like基因敲除載體鑒定
    3.4 小結(jié)與討論
第四章 植物表達載體的遺傳轉(zhuǎn)化
    4.1 材料
        4.1.1 菌株和植物材料
        4.1.2 主要儀器設(shè)備
        4.1.3 主要試劑
    4.2 方法
        4.2.1 電擊轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        4.2.2 種子的無菌種植
        4.2.3 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化植物
        4.2.4 植物組織培養(yǎng)
        4.2.5 轉(zhuǎn)基因植株的PCR檢測
    4.3 結(jié)果分析
        4.3.1 轉(zhuǎn)基因植株的鑒定
        4.3.2 轉(zhuǎn)基因植株表型觀察
    4.4 結(jié)果與討論
第五章 番茄OPA3-like基因功能初步分析
    5.1 材料
        5.1.1 植物材料
        5.1.2 實驗試劑
        5.1.3 試劑配置
    5.2 方法
        5.2.1 Sl OPA3-like基因的T2 代轉(zhuǎn)基因煙草的分離比統(tǒng)計
        5.2.2 Sl OPA3-like基因的T2 代轉(zhuǎn)基因煙草的表型觀察
        5.2.3 鹽脅迫實驗
        5.2.4 機械摩擦接毒實驗
        5.2.5 Sl OPA3-like基因的轉(zhuǎn)基因煙草葉片橫細胞形態(tài)觀察
    5.3 結(jié)果分析
        5.3.1 Sl OPA3-like基因的T2 代轉(zhuǎn)基因煙草的獲得
        5.3.2 Sl OPA3-like基因的轉(zhuǎn)基因煙草的子葉表型觀察
        5.3.3 Sl OPA3-like基因的轉(zhuǎn)基因煙草的子葉花葉現(xiàn)象在T2 代煙草中的表達
        5.3.4 Sl OPA3-like基因的轉(zhuǎn)基因煙草真葉表型恢復(fù)現(xiàn)象
        5.3.5 Sl OPA3-like基因煙草真葉細胞形態(tài)觀察
        5.3.6 機械接毒煙草的現(xiàn)象
        5.3.7 高鹽對Sl OPA3-like基因轉(zhuǎn)基因煙草的影響
    5.4 小結(jié)與討論
第六章 結(jié)論與討論
    6.1 植物OPA3-like的生物信息學(xué)分析
    6.2 T1 代轉(zhuǎn)基因煙草和番茄表型分析
    6.3 T2 代轉(zhuǎn)基因煙草Slp BP-OPA3-like表型分析及生理檢測
    6.4 后續(xù)實驗與展望
參考文獻
致謝
作者簡介
附件


【參考文獻】：
期刊論文
[1]番茄OPA3-like基因的生物信息學(xué)分析及原核表達[J]. 劉麗娜,周東,張麗麗,崔百明,鄭銀英.  生物技術(shù). 2017(03)
[2]馬鈴薯Y病毒輔助成分蛋白酶與加工番茄OPA3-like蛋白結(jié)合及其定位研究[J]. 張麗麗,崔百明,鄭銀英,黃先忠,向本春.  石河子大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2014(04)
[3]RNA干擾技術(shù)及其應(yīng)用前景[J]. 朱乃甫,和立挺,鄧凱.  生物技術(shù)世界. 2013(05)
[4]OPA3基因突變導(dǎo)致視神經(jīng)萎縮、白內(nèi)障和錐體外路徑病癥[J]. Verny C.,Amati-Bonneau P.,Dubas F.,司冰心.  世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘.眼科學(xué)分冊. 2005(09)
[5]RNA干擾在哺乳動物中的應(yīng)用[J]. 鄭茂波.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2005(08)
[6]RNA干擾技術(shù)的原理與應(yīng)用[J]. 馬鵬鵬,薛社普,韓代書.  中國組織化學(xué)與細胞化學(xué)雜志. 2003(02)
[7]RNA干涉及其應(yīng)用前景[J]. 張利生,陳大元.  遺傳. 2003(03)
[8]酵母雙雜交技術(shù)研究進展[J]. 張迪,霍克克,顧科隆,趙翔,李育陽.  高技術(shù)通訊. 2000(03)

碩士論文
[1]番茄OPA3-like基因的功能研究[D]. 劉麗娜.石河子大學(xué) 2017



本文編號：2961556