發(fā)布時間：2020-12-16 07:08

　　Mg2+是植物細胞中含量最豐富的二價陽離子,也是生物體生長發(fā)育過程中不可或缺的礦物質(zhì)素。植物體內(nèi)存在一類Mg2+轉(zhuǎn)運體,能夠應(yīng)答鎂脅迫,在植物細胞中調(diào)控Mg2+的吸收和轉(zhuǎn)運以及維持細胞內(nèi)Mg2+平衡方面發(fā)揮重要作用。1、通過TMHMM在線網(wǎng)頁對AtZntB4（At2g04305）的蛋白質(zhì)序列進行分析,發(fā)現(xiàn)其C端有兩個跨膜區(qū),預(yù)測該基因可能編碼一個與跨膜相關(guān)的蛋白。通過檢測不同濃度和不同時間鎂脅迫處理的擬南芥幼苗的根部和冠部該基因的表達情況,可知AtZntB4的表達與Mg2+相關(guān)。2、通過將AtZntB4導(dǎo)入缺乏Zn2+轉(zhuǎn)運體的釀酒酵母突變體ZHY3中進行Zn2+轉(zhuǎn)運能力檢測,實驗結(jié)果表明AtZntB4和Zn2+轉(zhuǎn)運無關(guān)。進一步利用鼠傷寒沙門氏桿菌突變株MM281來驗證了其是否具有Mg2+轉(zhuǎn)運能力,實驗結(jié)果說明AtZntB4能夠互補MM281的Mg2+轉(zhuǎn)運缺陷。3、用缺乏不同二價金屬陽離子（Ca2+、Fe2+、Zn2+、Mn2+、Mg2+）條件對atzntb4突變體和野生型擬南芥進行處理,結(jié)果顯示,在缺乏Ca2+和Mg2+條件下,atzntb4突變體長勢相較于野生型較弱,但在缺Mg2+條... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－ｌ／ｌ／Ｚ／＂似基因克隆及菌液ＰＣＲ鑒定結(jié)果（Ｍ：?ＤＬ２０００；箭頭所指為目的條帶；ａ：??基因克隆結(jié)果；ｂ：?ＡＺ價基因菌液ＰＣＲ鑒定結(jié)果）??－

菌中的ＣｏｒＡ蛋白結(jié)構(gòu)，都有兩個跨膜區(qū)，在第一個跨膜區(qū)上存在轉(zhuǎn)運Ｍｇ２＋所必須的??ＧＭＮ保守基序。??如圖２－２所示：基因序列預(yù)測跨膜區(qū)分析。通過對／＾２？劇的基因序列分??析，我們發(fā)現(xiàn)，Ａ辦必／基因開放閱讀讀碼框含有１３０５個堿基對，編碼４３４個氨基酸；??通過ＴＭＨＭＭ在線分析，在ＡｔＺｎｔＢ４的Ｃ端有兩個跨膜區(qū)，已知ＣｏｒＡ家族中的Ｍｇ２＋??轉(zhuǎn)運蛋白的一個重要區(qū)域是Ｃ端的兩個跨膜區(qū)，所以可以預(yù)測出該蛋白與Ｍｇ２＋可能具??有相關(guān)性。??ＴＭＨＭＭ?ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ?ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｉｅｓ?ｆｏｒ?ＷＥＢＳＥＱＵＥＮＣＥ??ｉ?：）?ＩＴ??■?■??０Ｌ＿＿＿＿＿＿，．．．．．．ｍＭ??５０?１００?１５０?２００?２５０?３００?３５０?４００??ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ??ｉｎｓｉｄｅ??ｏｕｔｓｉｄｅ??圖２－２?基因序列預(yù)測跨膜區(qū)分析??Ｆｉｇ．?２－２?Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏ＼ＡｔＺｎｔＲ４?ｇｅｎｅ?ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ?ｉｎ?ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ?ｒｅｇｉｏｎ??２．３本章小結(jié)??根據(jù)文獻報道，對擬南芥Ｍｇ２＋轉(zhuǎn)運家族－ＣｏｒＡ家族成員的蛋白結(jié)構(gòu)分析，Ｃ端均存??在兩個疏水的跨膜區(qū)。本研究中通過克隆得到Ｊ／Ｚ咐５４基因，對其基因序列進行分析發(fā)??現(xiàn)，在Ｃ端也有兩個跨膜區(qū)，第一個跨膜區(qū)由第３３１－３５３之間的氨基酸序列組成，第二??個跨膜區(qū)由第３７３－３９５之間的氨基酸序列饑成。所以從序列結(jié)構(gòu)上分析我們推測??可能編碼一個和跨膜相關(guān)的蛋白。對于推測的合理性

基因表達量的變化直觀判斷出在缺鎂和高鎂處理下該基因在根部和冠部誘導(dǎo)不??同時間后轉(zhuǎn)錄活性情況。??如圖３－１所示，不同時間缺鎂和高鎂誘導(dǎo)下基因在擬南芥冠部和根中表達??模式。以２．５?ｍＭ處理２４?ｈ作為對照，發(fā)現(xiàn)在缺鎂和高鎂誘導(dǎo)下基因在冠中的??轉(zhuǎn)錄活性下降。缺鎂誘導(dǎo)８?ｈ后在冠中的表達量降到最低值，僅為對照的０．１１８；??誘導(dǎo)２４ｈ后，在培養(yǎng)基中加２．５ｍＭＭｇ２＋誘導(dǎo)２４ｈ，及／的表達量又回到近乎正常??水平；高鎂誘導(dǎo)２?ｈ和８?ｈＡＺｎ／似在冠中的表達量均較低，分別為對照的０．５１７６和０．４９２５。??缺鎂和高鎂誘導(dǎo)下基因在根中的轉(zhuǎn)錄活性提高。缺鎂誘導(dǎo)２４?ｈ后在根??－１９－??


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