葡萄球菌腸毒素B（SEB）是金黃色葡萄球菌（金葡菌）產(chǎn)生的一種超抗原,具有極大的毒性,可以在很低的濃度下激活大量的CD4⁺T細(xì)胞。而細(xì)胞因子的大量產(chǎn)生會引發(fā)“細(xì)胞因子風(fēng)暴”,進(jìn)而導(dǎo)致急性毒性效應(yīng)。作為一種重要的腸毒素,SEB不僅是食物中毒的主要原因,也是潛在的生物威脅,可以被發(fā)展成一種氣溶膠化的生物武器。同時,因為SEB具有較大的毒性、穩(wěn)定性和易獲得性,美國國家疾病控制中心將其列為生化武器清單上的重要致病毒素。因此,對SEB進(jìn)行快速準(zhǔn)確的檢測是非常重要和迫切的。AlphaLISA是一種基于兩個微球的技術(shù)。當(dāng)這兩種微球彼此接近時,用波長為680 nm的光激發(fā)供體微球產(chǎn)生能量,將周圍反應(yīng)體系中的氧分子轉(zhuǎn)變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài),并將能量傳遞給受體微球,最終產(chǎn)生520⁶20 nm的熒光。該技術(shù)操作便捷,反應(yīng)用時少,均相免洗,并具有較高的靈敏度。本實驗建立了AlphaLISA檢測SEB的方法。對結(jié)果進(jìn)行分析,采用非線性回歸法進(jìn)行AlphaLISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立,緩沖液中SEB檢測的線性范圍為25 pg/mL至25 ng/mL,LOD為25 pg/mL,具有較高的靈... 

【文章來源】：軍事科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

金黃色葡萄球菌的結(jié)構(gòu)

第 2 頁圖 2 痰液樣本中的葡萄球菌Fig 2 Staphylococcus in sputum sample菌能夠產(chǎn)生許多毒素，這些毒素是根據(jù)它們的作用機制而分組的毒素，可引起孔洞形成，并誘發(fā)促炎[5]。由此引起的細(xì)胞損傷可原因之 。致熱毒素與超抗氏族在結(jié)構(gòu)上是相關(guān)的，具有多種共酸序列同源度。它們通過與主要的組織形成相容性復(fù)合物(Mhc揮超抗原的作用，從而引起廣泛的 T 細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子反應(yīng)引起兩種疾病，即TSST和食物中毒。在20%的金葡菌分離株中發(fā)。TSST-1 在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)上與 SEB 更為相近。

圖 3 葡萄球菌侵入組織的發(fā)病機制Fig 3 SPAthogenesis of Staphylococcal Invasion of Tissue金葡菌是 種食源性致病菌，因能誘發(fā)多種疾病而得到廣泛的研究。經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，金葡菌主要有二十三種血清型的腸毒素。這二十三種毒素里，SEB 是導(dǎo)致不同條件下食物中毒如惡心、腹痛和嘔吐等現(xiàn)象的常見原因。SEB 由 239 個氨基酸組成，分子量為 28,336。通過氨基酸分析，能夠確定 SEB的完整序列[6]。SEB 的蛋白質(zhì)序列與腸毒素 C1 的蛋白質(zhì)序列具有廣泛的同源性，C1 也由 239 個氨基酸組成。SEB 的前體分子量約為 32kb，被確認(rèn)為產(chǎn) SEB 金葡菌的膜組分。在攜帶克隆 SEB 基因(entB)的大腸桿菌菌株的細(xì)胞膜中也發(fā)現(xiàn)了 SEB前體。SEB 的作用機制尚不完全清楚，但其對腹腔臟器的催吐作用可能導(dǎo)致嘔吐和腹瀉[7]。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于生物條形碼探針和金納米顆粒的大腸桿菌O157:H7檢測[J]. 蒲小平,楊海麟,周楠迪.  食品科學(xué). 2011(08)
[2]種子聚合法制備單分散交聯(lián)聚苯乙烯微球的研究[J]. 由英才,祁東風(fēng),張保龍,丁培元,杜宗杰,黃吉甫.  高分子材料科學(xué)與工程. 1994(06)



本文編號：2913704