蟬花是一種歷史悠久的藥食用真菌,含有多糖、蟲草酸、核苷類、甾醇類以及多肽類等生物活性物質(zhì)。隨著自然環(huán)境的變化,天然蟬花資源稀缺,因此通過(guò)人工進(jìn)行蟬花培育成為科研工作的一個(gè)熱點(diǎn)。本文從分析蟬花子實(shí)體的微生物群落結(jié)構(gòu)入手,找出其中的關(guān)鍵菌株,再對(duì)關(guān)鍵菌株進(jìn)行分離以選育出發(fā)酵性狀優(yōu)良的菌株,進(jìn)而開展純種的發(fā)酵培養(yǎng)研究,通過(guò)添加蠶蛹粉的發(fā)酵模擬培養(yǎng)出與子實(shí)體成分接近的蟲菌復(fù)合物。論文的主要工作如下:(1)采用高通量測(cè)序技術(shù),分析了不同產(chǎn)地、不同部位以及不同發(fā)育階段的野生蟬花子實(shí)體的微生物群落結(jié)構(gòu)。Isaria cicadae在不同產(chǎn)地的蟬花子實(shí)體真菌群落中處于優(yōu)勢(shì)地位,其中OTU6782為優(yōu)勢(shì)OTU,而蟬花細(xì)菌群落的結(jié)構(gòu)由于產(chǎn)地不同而發(fā)生明顯變化。Isaria cicadae在蟬花子實(shí)體不同部位(表面泥土、孢梗束、菌皮、帶泥菌皮以及菌核)的真菌群落中均處于優(yōu)勢(shì)地位,其中OTU6782相對(duì)豐度最高。在蟬花子實(shí)體發(fā)育過(guò)程中,Isaria cicadae迅速占據(jù)真菌群落優(yōu)勢(shì)地位,且該物種具有豐富的種內(nèi)多樣性,其中OTU6782為優(yōu)勢(shì)OTU,此外OTU12109,OTU13152,OTU486,OTU2297,OTU11491,OTU246,OTU58,OTU2950,OTU8787,OTU73,OTU130等細(xì)菌與Isaria cicadae在蟬花發(fā)育過(guò)程中共同存在。(2)從蟬花子實(shí)體中分離了Isaria cicadae 8196、82542、81957和TZC-3菌株,對(duì)其進(jìn)行了ITS和18S rRNA基因序列分析,并通過(guò)液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)篩選出發(fā)酵性能較為優(yōu)良的菌株。分子學(xué)及形態(tài)學(xué)鑒定表明,8196、82542、81957和TZC-3菌株的ITS rRNA基因序列與Isaria cicadae相似性在99%以上,與野生蟬花真菌OTU6782序列相似性最高達(dá)到99.65%。對(duì)4株菌分別進(jìn)行液態(tài)培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)不同菌株在生物量、胞內(nèi)外多糖含量、胞內(nèi)外核苷含量存在一定的差異,其中TZC-3菌株在生物量、胞內(nèi)多糖總量以及腺苷的產(chǎn)量和產(chǎn)率上都呈現(xiàn)明顯的優(yōu)勢(shì),因而選擇該菌株用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。(3)考察了蟬蛹粉對(duì)Isaria cicadae TZC-3發(fā)酵過(guò)程的影響,分析了蟬蛹粉強(qiáng)化發(fā)酵蟬花菌絲體的成分組成。結(jié)果表明,蟬蛹粉的添加可在一定程度上促進(jìn)蟬花菌絲體中胞內(nèi)多糖、腺苷和N6-(2-羥乙基)-腺苷(HEA)的合成,其中添加4%蟬蛹粉發(fā)酵的強(qiáng)化菌絲體質(zhì)量較高,胞內(nèi)多糖產(chǎn)率為14.55 mg/g,胞內(nèi)多糖產(chǎn)量為74.78 mg/100 mL;腺苷產(chǎn)率為1.22 mg/g,產(chǎn)量為6.66 mg/100 mL;HEA產(chǎn)率為1.58 mg/g,產(chǎn)量為8.63mg/100 mL。與對(duì)照組菌絲體和蟬蛹粉相比,強(qiáng)化菌絲體的成分(一般成分、水解氨基酸、游離氨基酸、水解單糖、脂肪酸)與野生蟬花子實(shí)體更加接近,其中部分游離氨基酸(天冬氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸、亮氨酸和脯氨酸)和水解后的單糖(阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和木糖)含量提高最為明顯。
【學(xué)位單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：Q93-33;S567.39
【部分圖文】：

蟬花、蟬茸、蟲花、蟬草和胡蟬，是與冬蟲夏草、蛹蟲草相提并論的另 400 多種[1]，但具有較高藥用價(jià)值且其中，中醫(yī)認(rèn)為蟬花味甘、性寒，效與冬蟲夏草和蛹蟲草近似的優(yōu)質(zhì)江以南，包括四川、江蘇、浙江、福、南韓等地區(qū)也有分布[2]。一般來(lái)說(shuō)大，有竹蟬活動(dòng)，枯枝落葉層比較厚體長(zhǎng)度 15-80 mm 左右，主要由蟲體3.5 cm，直徑 1-1.4 cm，形狀與蟬若mm，是最外層乳白色包裹蟲體的結(jié)“菌核”是真菌利用蟬的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)生長(zhǎng)，呈長(zhǎng)條形或棒狀，新鮮時(shí)白色，白色或淡黃色的花粉，即為蟬花孢蛹蟲草更容易獲得，并且蟬花的形境的代表產(chǎn)物。

第一章 緒論蟬若蟲上，逐漸生長(zhǎng)出芽管并同時(shí)分泌幾丁質(zhì)酶，從而穿過(guò)蟬蛹堅(jiān)硬的外殼進(jìn)入到內(nèi)部，侵入的部分菌絲通過(guò)出芽的方式增生，并且產(chǎn)生豐富的代謝物質(zhì)使蟲體致死，蟲體的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)生長(zhǎng)逐漸被菌絲利用侵染逐漸成為菌核，最終形成蟬花蟲菌復(fù)合體，成熟的蟬花產(chǎn)生孢子進(jìn)一步侵染更多的蟬蛹[4-6]（圖 1-2）。對(duì)于蟬花生長(zhǎng)過(guò)程和侵染機(jī)制的研究為后來(lái)研究蟲生真菌與寄主之間的相互關(guān)系、蟬花的形成機(jī)制和過(guò)程及通過(guò)模擬自然生長(zhǎng)條件人工培育蟬花奠定了基礎(chǔ)。

其中腺苷（圖1-3A）、N6-(2-羥乙基)-腺苷（圖 1-3B）由于具有良好的藥用價(jià)值和滋補(bǔ)作用成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)，同時(shí)也是蟲草類制品的質(zhì)量控制指標(biāo)。在蟬花核苷的研究中，Wang 等[40]通過(guò)在蠶蛹上固態(tài)培養(yǎng)出蟬花子實(shí)體并測(cè)定了其中腺苷和蟲草素的含量，結(jié)果表明其中腺苷和蟲草素含量分別為 1421.45 μg/g 和 1398.12 μg/g；Olatunji 等[14]評(píng)價(jià)了來(lái)自蟬擬青霉的腺苷對(duì)谷氨酸誘導(dǎo)的 PC12 細(xì)胞中的氧化應(yīng)激的保護(hù)作用，結(jié)果顯示腺苷增加 GSH-Px和 SOD 的活性，保留線粒體膜電位（MMP），增加 Bcl-2/Bax 比率，并降低 ERK，p38和 JNK 的表達(dá)
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本文編號(hào)：2882516