食源性致病菌可附著于食品加工器具、設(shè)備、食品等表面,可在其上生長,并可進(jìn)一步形成生物菌膜,造成交叉污染,極大增加了食品安全風(fēng)險(xiǎn),食源性致病菌生物菌膜是目前食品工業(yè)亟待解決的重要難題。近年來,non-0157大腸桿菌尤其是“big six”暴發(fā)流行的報(bào)道逐漸增多,已成為重要的食源性致病菌之一。目前,關(guān)于non-0157大腸桿菌生物菌膜的研究少見報(bào)道。Non-0157大腸桿菌與大腸桿菌0157:H7相似,也具有一定的耐酸性,食品加工過程中存在的酸性環(huán)境可導(dǎo)致其發(fā)生應(yīng)激響應(yīng),不同溫度可能影響其應(yīng)激響應(yīng),并進(jìn)一步影響其生物菌膜的形成。因此,本論文以non-O157大腸桿菌中最主要血清型——026為研究對象,首先對本實(shí)驗(yàn)室收集的22株大腸桿菌026進(jìn)行粘附特性和菌體表面特性分析,進(jìn)而選取粘附性能不同的菌株探討不同溫度不同乳酸濃度對其生物菌膜形成的影響,進(jìn)一步采用CLSM和SEM技術(shù)揭示其菌膜微觀結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)變化。本研究將為酸性食品實(shí)際生產(chǎn)加工環(huán)境中大腸桿菌026風(fēng)險(xiǎn)評估提供理論參考,為進(jìn)一步研究清除大腸桿菌026生物菌膜有效方法提供科學(xué)依據(jù)。具體研究內(nèi)容和結(jié)果如下:1、大腸桿菌026不同菌株粘附性能及菌體表面特性分析同時(shí)采用微孔板結(jié)晶紫染色法和不銹鋼片計(jì)數(shù)法對實(shí)驗(yàn)室收集的22株大腸桿菌026進(jìn)行粘附性能比較,25℃培養(yǎng)72h后,按照測得OD值和培養(yǎng)計(jì)數(shù)結(jié)果對菌株的粘附強(qiáng)弱進(jìn)行分類。微孔板結(jié)晶紫染色法結(jié)果表明,22株大腸桿菌026均有粘附性,但存在明顯菌株差異(P0.05),其中菌株105H2粘附性最弱,菌株126Z最強(qiáng)。鋼片計(jì)數(shù)法結(jié)果顯示22株大腸桿菌026均在不銹鋼片表面形成了菌膜,但菌膜量存在明顯菌株差異(P0.05),但與微孔板結(jié)晶紫染色法得出的菌株粘附力強(qiáng)弱不完全一致。采用軟瓊脂平板評估菌株泳動(dòng)性,結(jié)果顯示各菌株泳動(dòng)性存在差異,swimming 24 h時(shí)菌圈直徑比較菌株123Z2最大,菌株G13Z2最小,swarming 20 h菌圈直徑比較菌株83Z2的最大,菌株57Z1最小。大腸桿菌026表面疏水性和得失電子能力通過其與二甲苯、氯仿和乙酸乙酯溶液的親和力來評估,結(jié)果發(fā)現(xiàn)對三種物質(zhì)的親和力均存在明顯的菌株差異,菌株40Z2疏水性較強(qiáng),菌株89Z1供電子能力較強(qiáng),菌株F7Z2得電子能力較強(qiáng)。進(jìn)一步相關(guān)性分析表明,菌體在不銹鋼片上的粘附能力與微孔板上的粘附力存在顯著正相關(guān)性(P0.05),Swimming和Swarming 兩種泳動(dòng)能力之間存在極顯著正相關(guān)性(P0.01),而泳動(dòng)性、疏水性與粘附能力之間不存在相關(guān)性。2、不同溫度乳酸應(yīng)激下大腸桿菌026生物菌膜形成過程根據(jù)上一章試驗(yàn)結(jié)果,選取粘附力不同的兩株菌株(較強(qiáng)粘附力菌株126Z和較弱粘附力菌株G13Z2)進(jìn)行生物菌膜形成過程研究。以pH 4.0、5.0乳酸酸化的TSB及正常TSB為培養(yǎng)基質(zhì),分別研究15℃和25℃下乳酸對其生物菌膜形成的影響。結(jié)果顯示,正常TSB中兩菌株菌膜形成15℃時(shí)均低于25℃時(shí),兩種溫度下菌株126Z菌膜形成均高于菌株G13Z2。乳酸pH值對大腸桿菌026菌膜形成具有一定抑制作用,培養(yǎng)條件酸性越強(qiáng),浮游菌數(shù)和菌膜形成量越少。溫度對026浮游菌數(shù)和菌膜形成的影響與乳酸pH值有關(guān),低濃度乳酸時(shí),溫度越高浮游菌數(shù)和菌膜量增長越快。高濃度乳酸時(shí),15℃下兩株菌浮游菌數(shù)和菌膜形成受到抑制,后期下降;25℃下兩菌株動(dòng)態(tài)變化過程差異明顯,菌株126Z后期浮游菌數(shù)和菌膜量存在波動(dòng),而菌株G13Z2浮游菌數(shù)和菌膜形成均顯著下降。結(jié)果表明,乳酸應(yīng)激時(shí)大腸桿菌026菌膜形成與溫度、菌株粘附力相關(guān)。3、酸應(yīng)激對大腸桿菌026生物菌膜微觀結(jié)構(gòu)的影響在上述試驗(yàn)基礎(chǔ)上,以pH 5.0乳酸酸化的TSB和正常TSB為培養(yǎng)基質(zhì),利用共聚焦激光掃描顯微鏡(CLSM)和掃描電鏡(SEM)技術(shù)對菌株126Z和菌株G13Z2形成的生物菌膜進(jìn)行微觀結(jié)構(gòu)觀察,比較粘附力不同的兩株菌1、3、5、7d在兩種溫度、兩種TSB基質(zhì)中生物菌膜微觀結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果表明,酸應(yīng)激下大腸桿菌026形成具有一定空間結(jié)構(gòu)的生物菌膜,酸性環(huán)境下成膜過程較在中性環(huán)境緩慢;粘附力不同的兩株菌形成生物菌膜的形態(tài)結(jié)構(gòu)受時(shí)間、溫度和酸度的影響,粘附性較強(qiáng)菌株126Z形成的生物菌膜空間結(jié)構(gòu)更致密。
【學(xué)位單位】：南京師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：TS201.3
【部分圖文】：

圖１．２本課題技術(shù)路線圖??Ｆｉｇ．?１．２?Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ?ｒｏａｄｍａｐ?ｏｆ?ｔｈｉｓ?ｐｒｏｊｅｃｔ??

Ｎｏｔｅ：?Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｌｏｗｅｒｃａｓｅ?ｌｅｔｔｅｒｓ?ｉｎｄｉｃａｔｅ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ?（Ｐ?＜?０．０５）．??２．２．３菌體表面泳動(dòng)能力比較??２２株大腸桿菌０２６的泳動(dòng)能力見圖２．２，通過ｓｗｉｍｍｉｎｇ?８?ｈ、ｓｗｉｍｍｉｎｇ?２０?ｌｉ和??ｓｗａｒｍｉｎｇ?２４?ｈ的菌圈直徑大小來評價(jià)，圖２．３為部分大腸桿菌０２６的泳動(dòng)性試驗(yàn)平??板照片。由圖２．２可知，各菌株間泳動(dòng)性具有差異，菌株１２３Ｚ２?ｓｗｉｍｍｉｎｇ?２４?ｈ時(shí)的??菌圈直徑最大，而菌株Ｇ１３Ｚ２?ｓｗｉｍｍｉｎｇ?２４?ｈ時(shí)的菌圈直徑最小，兩個(gè)菌株之間??ｓｗｉｍｍｉｎｇ的菌圈大小相差十倍多，菌株１２６Ｚｓｗｉｍｍｉｎｇ８－２４ｈ的階段增長比較快，??其中，部分菌株具有顯著性差異（戶＜?〇．〇５）。對于ｓｗａｒｍｉｎｇ?２０?ｈ，２２株菌株之間的??菌圈大小差值遠(yuǎn)小于ｓｗｉｍｍｉｎｇ，其中菌株８３Ｚ２的ｓｗａｒｍｉｎｇ?２０?ｈ菌圈直徑最大，菌??株５７Ｚ１的ｓｗａｒｍｉｎｇ?２０?ｈ菌圈直徑最小。??１７??

菌株名稱??Ｎａｍｅ?ｏｆ?Ｓｔｒａｉｎｓ??圖２．２?２２株大腸桿菌０２６菌體泳動(dòng)能力（ｎ＝５）??Ｆｉｇ．２．２?Ｍｏｔｉｌｉｔｙ?ｏｆ?２２?ｓｔｒａｉｎｓ?ｏｆ?Ｅ．?ｃｏｌｌ?０２６?（ｎ＝５）??注．？相同指標(biāo)中，不同小寫字母表示具有顯著性差異（Ｐ＜〇．〇５）。??Ｎｏｔｅ：?Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｌｏｗｅｒｃａｓｅ?ｌｅｔｔｅｒｓ?ｉｎｄｉｃａｔｅ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｓａｍｅ?ｉｎｄｅｘ?（Ｐ?＜?０．０５）．??■■Ｋ３Ｉ??圖２．３?—些大腸桿菌０２６菌株泳動(dòng)性試驗(yàn)平扳圖片??Ｆｉｇ．２．３?Ｐｌａｔｅ?ｐｉｃｔｕｒｅｓ?ｏｆ?ｓｏｍｅ?Ｅ．?ｃｏｌｉ?０２６?ｉｓｏｌａｔｅｓ?ｆｏｒ?ｓｗｉｍｍｉｎｇ?ａｎｄ?ｓｗａｍｉｉｎｇ?ｔｅｓｔｓ??２．２．４菌體表面疏水性比較??２２株大腸桿菌０２６的表面疏水性和得失電子能力通過其與二甲苯、氯仿和乙酸??乙酯溶液的親和力來評估，試驗(yàn)結(jié)果見表２．２。??１８??
【參考文獻(xiàn)】

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1 王虎虎;李諾;李韻晗;徐幸蓮;;沙門氏菌生物菌膜的結(jié)構(gòu)特征及在食品接觸面的轉(zhuǎn)移[J];核農(nóng)學(xué)報(bào);2015年12期

2 陶健;曹貝貝;魏法山;周瓊瓊;韓麗;程慧芳;王亞賓;胡慧;;致病性大腸桿菌O157:H7生物被膜形成的影響因素研究[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2015年08期

3 吳謙;鄧曦;馬悅;唐書澤;;副溶血弧菌在玻璃表面生物菌膜的生長特性及超聲波法解離作用[J];現(xiàn)代食品科技;2015年04期

4 吳嫚;李森;吳淑燕;陳國薇;劉芳;張超;董慶利;劉箐;;食源性致病菌菌膜形成影響因素研究進(jìn)展[J];食品科學(xué);2015年05期

5 姚勇;;關(guān)于食品中大腸桿菌檢測方法的研究[J];食品安全導(dǎo)刊;2014年09期

6 夏詩琪;賴衛(wèi)華;劉道峰;崔希;;O26等產(chǎn)志賀毒素的6種血清型大腸桿菌的暴發(fā)流行情況及檢測研究現(xiàn)狀[J];食品科學(xué);2014年17期

7 李南薇;杜冰;楊公明;余銘;;蠟樣芽孢桿菌及其生物被膜對有機(jī)酸及乙醇的抗性比較[J];農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào);2013年21期

8 李紅愛;唐姝姝;劉永強(qiáng);鄧曦;唐書澤;吳希陽;陳振強(qiáng);;亞甲基藍(lán)對單增李斯特菌菌膜的光動(dòng)力殺傷作用[J];食品科學(xué);2014年03期

9 郝江燕;胡文忠;馮敘橋;何煜波;呂曉萌;;食品中大腸桿菌生物檢測方法的研究進(jìn)展[J];食品工業(yè)科技;2013年15期

10 徐引弟;王治方;朱文豪;梁躍;郭成留;;腸外致病性大腸桿菌的研究進(jìn)展[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2011年07期

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本文編號：2845929