【摘要】：鄰苯二甲酸酯(PAEs)是通常被用于添加在塑料制品中,使塑料變得柔軟富有彈性的一類化學(xué)添加劑,由于塑料制品和個人護理用品的廣泛使用而進入生物體和環(huán)境中,近年來由于其在較低的濃度下就能引起一系列機體內(nèi)反應(yīng)的內(nèi)分泌干擾物效應(yīng)而受到國內(nèi)外學(xué)者廣泛的關(guān)注。鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)是PAEs中最常見的一種,也是結(jié)構(gòu)最簡單,分子量最小的一種,由于通常認為PAEs的毒性與側(cè)鏈基團的大小呈正相關(guān),所以對DMP的毒性研究較其他常見PAEs來說相對較少。但DMP已被列為最優(yōu)先被控制的污染物之一,且DMP在進入生物體后的第一級代謝產(chǎn)物鄰苯二甲酸單酯具有更高的毒性,所以應(yīng)引起關(guān)注。斑馬魚作為一種模式生物,由于其種種優(yōu)越性成為研究毒性機理的優(yōu)良生物模型。為了進一步探究DMP的毒性作用機制,選用斑馬魚作為生物模型,研究鄰苯二甲酸二甲酯在短期急性暴露和長期慢性暴露下,對斑馬魚的毒性作用。在短期急性暴露中測定了DMP的半致死濃度LC50,并分別從蛋白和分子水平上測定了斑馬魚在氧化應(yīng)激、能量代謝和免疫方面的生物標志物變化。在不同DMP濃度暴露下測定了超氧化物歧化酶、過氧化氫酶的酶活變化和谷胱甘肽、丙二醛的含量變化,發(fā)現(xiàn)隨著DMP濃度的升高,SOD、CAT、GSH均呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢,MDA的含量則先基本不變后又上升。在分子水平上通過實時熒光定量PCR測定了氧化應(yīng)激、能量代謝和免疫相關(guān)基因的表達量變化情況。結(jié)果表明,DMP會對氧化應(yīng)激有關(guān)基因的表達量產(chǎn)生影響,從而引起氧化損傷;并會造成有氧糖代謝途徑向無氧糖酵解途徑轉(zhuǎn)化,同時引起非特異性免疫功能的下降。在長期毒性暴露中,選取30d、60d和90d三個時間點測定了斑馬魚體重的變化,并從分子水平上檢測了關(guān)于斑馬魚調(diào)控甲狀腺激素分泌的下丘腦-垂體-甲狀腺(HPT)軸相關(guān)基因的表達,發(fā)現(xiàn)環(huán)境濃度下DMP的長期暴露會引起斑馬魚的甲狀腺功能的紊亂。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：X171.5
【圖文】：

力逡逑在邋０，邋５，１０，１５，邋２０，２５，邋３０，邋３５，４０，４５邋ｍｇ／Ｌ邋的邋ＤＭＰ邋濃度梯度下，９６ｈ逡逑暴露的斑馬魚ＳＯＤ和ＣＡＴ酶活力如圖２和圖３所示。其中ＳＯＤ酶活力在１５邋ｍｇ／Ｌ逡逑達到最大值３１６．４７邋Ｕ／ｇ邋（抑制ＮＢＴ光化還原的５０％為一個酶活性單位），ＣＡＴ酶逡逑活力在２５邋ｍｇ／Ｌ達到最大值５１５．５６邋Ｕ／ｇ邋？邋ｍｉｎ邋（以ｌｍｉｎ內(nèi)Ａ２４Ｑ減少０．１的酶量為逡逑一個酶活單位），兩種酶均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢。逡逑４００逡逑３５０邋－邐Ｔ邐＾邋ＳＯＯ逡逑０邐５邐１０邐１５邐２０邐２５邐３０邐３５邐４０邐４５逡逑ＤＭＰ濃度（ｍｇ／Ｌ）逡逑圖２不同ＤＭＰ濃度暴露下斑馬魚的ＳＯＤ酶活力逡逑Ｆｉｇ．邋２邋ＳＯＤ邋ｅｎｚｙｍｅ邋ａｃｔｉｖｉｔｙ邋ｏｆ邋ｚｅｂｒａｆｉｓｈ邋ｅｘｐｏｓｅｄ邋ｔｏ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＤＭＰ逡逑邐２２邐逡逑

Ｆｉｇ．邋３邋ＣＡＴ邋ｅｎｚｙｍｅ邋ａｃｔｉｖｉｔｙ邋ｏｆ邋ｚｅｂｒａｆｉｓｈ邋ｅｘｐｏｓｅｄ邋ｔｏ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＤＭＰ逡逑斑馬魚在不同急性暴露時期肝臟的超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和谷胱甘肽轉(zhuǎn)移逡逑酶（ＧＳＴ）活性變化如圖４和圖５所示。其中０為對照組，Ｌ、Ｍ、Ｈ分別為低濃逡逑度、中濃度、高濃度。逡逑３０邋ｒ逡逑Ｈ２４ｈ逡逑＾邋２５邐煖逡逑Ｉ邋２０邋－邐Ｉ邐0９６ｈ逡逑ｆ邐：逡逑ｗ邋１５邋－邐ｊ邐ＩＢ逡逑宏廣ｉ邐Ｉｎ逡逑？邋１０邋－邋Ｔ邐｜邐、逡逑０１邋ｂ：丨WＩ邐ｐｔｊｎ邋ｎW邋ｕ＿逡逑０邐Ｌ邐Ｍ邐Ｈ逡逑圖４斑馬魚在急性暴露不同時期肝臟ＧＳＴ酶活性逡逑Ｆｉｇ．邋４邋Ｌｉｖｅｒ邋ＧＳＴ邋ａｃｔｉｖｉｔｙ邋ｉｎ邋ｚｅｂｒａｆｉｓｈ邋ａｔ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｓｔａｇｅｓ邋ｏｆ邋ａｃｕｔｅ邋ｅｘｐｏｓｕｒｅ逡逑邐２３邐逡逑

Ｆｉｇ．邋７邋Ｃｈａｎｇｅｓ邋ｏｆ邋ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ邋ｃｏｎｔｅｎｔ邋ｉｎ邋ｚｅｂｒａｆｉｓｈ邋ｅｘｐｏｓｅｄ邋ｔｏ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＤＭＰ逡逑３．４邋ＳＯＤ酶非變性電泳結(jié)果逡逑斑馬魚全魚組織的ＳＯＤ酶的非變性電泳如圖８￣１０所示。無抑制劑處理時可逡逑見三條ＳＯＤ同工酶條帶，條帶的亮度所反映的酶活性趨勢與ＳＯＤ活性檢測趨勢逡逑相一致。樣品經(jīng)乙醇－氯仿處理后可見三條同工酶條帶，由于上樣量較少故條帶逡逑較窄；經(jīng)雙氧水處理后則無條帶出現(xiàn)。逡逑［肩，丨，．Ｉ邋一『養(yǎng)…－－逡逑邐邋ｓｏｄｌ逡逑［ｉ，邐＇ｉ邋＂邐；邐？■ｉ邐９Ｄｄ２逡逑Ｉ邐ｆ邐－邋？邐ｙ邐—邐，逡逑０邋５邋１０邋１５邋２０邋２５邋３０邋３５邋４０邋４５逡逑V：媭：＇邐ＤＭＦＷ度（ｍｇ／Ｌ）邐二逡逑圖８邋ＳＯＤ酶不加抑制劑時的活性酶譜逡逑Ｆｉｇ．邋８邋Ｎａｔｉｖｅ－ＰＡＧＥ邋ｚｙｍｏｇｒａｍ邋ｏｆ邋ＳＯＤ邋ｗｉｔｈｏｕｔ邋ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ逡逑邐２５邐逡逑

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本文編號：2791148