發(fā)布時(shí)間：2020-07-16 16:34

【摘要】：敗育問題是植物界研究熱點(diǎn)之一,在作物常規(guī)育種及生產(chǎn)制種方面有著廣泛應(yīng)用,運(yùn)用敗育型植物表達(dá)載體遺傳轉(zhuǎn)化是引發(fā)植物不育的一種快捷策略。本文分別克隆了擬南芥花分生組織及花器官特異基因AP1的啟動(dòng)子和大腸桿菌RNaseH基因的編碼區(qū),構(gòu)建了敗育型植物表達(dá)載體pHZM13-AP1-RNaseH,并通過電擊法將其導(dǎo)入農(nóng)桿菌EHA105。以煙草C151為受體材料,經(jīng)農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化,共獲得轉(zhuǎn)化株35株�；ǚ酃苊劝l(fā)試驗(yàn)表明,轉(zhuǎn)化株花粉同對(duì)照間萌發(fā)活力并無差別;稱取種子百粒重,轉(zhuǎn)化株平均為6.6mg,對(duì)照株平均為9.1mg,表明二者差別顯著。進(jìn)一步電鏡掃描種子表面,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化株種皮表面褶皺狀紋飾減少,成因不明。種子萌發(fā)試驗(yàn)表明,轉(zhuǎn)化株種子發(fā)率較低,且表現(xiàn)萌發(fā)延遲。本研究表明,該敗育型植物表達(dá)載體極度削弱了宿主植物的育性,但自殺基因并未影響花器發(fā)生,這可能同所用啟動(dòng)子在異源表達(dá)背景下作用活性改變有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：牡丹江師范學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：Q943.2
【圖文】：

ＰａｃＩ逡逑圖２－１邋ｐＨＺＭ１３載體物理圖譜逡逑Ｆｉｇ．２－１邋Ｔｈｅ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ｐＨＺＭ邋１３邋ｖｅｃｔｏｒ逡逑Ｈ基因與ＡＰＩ啟動(dòng)子逡逑（Ｇｅｎｂａｎｋ登錄號(hào)Ｋ００９８５．１邋），來源于大腸桿菌。逡逑

N１．１邋ＲＮａｓｅＨ基因的獲得逡逑以大腸桿菌菌液為模板，用ＲＮａｓｅＨ的特異性引物進(jìn)行菌液ＰＣＲ擴(kuò)增，反逡逑應(yīng)產(chǎn)物用１％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，擴(kuò)增出４７４ｂｐ的特異性條帶（見圖３－１），并逡逑將ＰＣＲ產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。逡逑圖３－１邋ＲＮａｓｅＨ擴(kuò)增結(jié)果（圖中標(biāo)準(zhǔn)分＿了－量Ｍａｒｋｅｒ?yàn)椋模蹋担埃埃埃╁义希疲椋纾常卞澹裕瑁邋澹颍澹螅酰欤翦澹铮驽澹遥危幔螅澹龋ǎ模蹋担埃埃板澹停幔颍耄澹颍╁义希常保插澹粒校蓡?dòng)子的獲得逡逑以擬南芥基因組ＤＮＡ為模板，用ＡＰＩ的特異性引物進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增，將ＰＣＲ逡逑反應(yīng)產(chǎn)物用１％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，擴(kuò)增出約３．３５邋Ｋｂ的特異性條帶（見圖３－２）。逡逑蠢逡逑圖３－２邋ＡＰＩ擴(kuò)增結(jié)果（圖中標(biāo)準(zhǔn)分子量Ｍａｒｋｅｒ?yàn)椋模蹋担埃埃埃惧义希疲椋纾常插澹裕瑁邋澹颍澹螅酰欤翦澹铮驽澹粒校保ǎ模蹋担埃埃板澹停幔颍耄澹颍╁义希保梗义?

N１．１邋ＲＮａｓｅＨ基因的獲得逡逑以大腸桿菌菌液為模板，用ＲＮａｓｅＨ的特異性引物進(jìn)行菌液ＰＣＲ擴(kuò)增，反逡逑應(yīng)產(chǎn)物用１％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，擴(kuò)增出４７４ｂｐ的特異性條帶（見圖３－１），并逡逑將ＰＣＲ產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。逡逑圖３－１邋ＲＮａｓｅＨ擴(kuò)增結(jié)果（圖中標(biāo)準(zhǔn)分＿了－量Ｍａｒｋｅｒ?yàn)椋模蹋担埃埃埃╁义希疲椋纾常卞澹裕瑁邋澹颍澹螅酰欤翦澹铮驽澹遥危幔螅澹龋ǎ模蹋担埃埃板澹停幔颍耄澹颍╁义希常保插澹粒校蓡?dòng)子的獲得逡逑以擬南芥基因組ＤＮＡ為模板，用ＡＰＩ的特異性引物進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增，將ＰＣＲ逡逑反應(yīng)產(chǎn)物用１％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，擴(kuò)增出約３．３５邋Ｋｂ的特異性條帶（見圖３－２）。逡逑蠢逡逑圖３－２邋ＡＰＩ擴(kuò)增結(jié)果（圖中標(biāo)準(zhǔn)分子量Ｍａｒｋｅｒ?yàn)椋模蹋担埃埃埃惧义希疲椋纾常插澹裕瑁邋澹颍澹螅酰欤翦澹铮驽澹粒校保ǎ模蹋担埃埃板澹停幔颍耄澹颍╁义希保梗义?

【參考文獻(xiàn)】

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1 孫傳波;郭嘉;袁英;;農(nóng)桿菌介導(dǎo)玉米幼胚遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年12期

2 楊修勤;王志敏;湯青林;宋明;;抽薹開花調(diào)控基因SVP的作用機(jī)制[J];中國蔬菜;2013年02期

3 張冰玉;蘇曉華;周祥明;;楊樹花發(fā)育相關(guān)基因及基因工程調(diào)控[J];分子植物育種;2007年05期

4 蘭樹斌;李建國;;植物L(fēng)FY基因的研究進(jìn)展[J];廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué);2007年S1期

5 周瑋;劉齊元;陳雪峰;劉飛虎;曹槐;劉次全;;與煙草細(xì)胞質(zhì)雄性不育相關(guān)的線粒體基因atp9的mRNA研究[J];廣西植物;2007年01期

6 楊澤良,黨選民,曹振木,胡開林;利用基因工程創(chuàng)造植物雄性不育的策略[J];中國農(nóng)學(xué)通報(bào);2005年10期

7 胡青,高述民,李鳳蘭;植物雌性不育的研究進(jìn)展[J];北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2004年01期

8 李冰,劉宏濤,孫大業(yè),周人綱;植物熱激反應(yīng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)理[J];植物生理與分子生物學(xué)學(xué)報(bào);2002年01期

9 易平,汪莉,孫清萍,朱英國;紅蓮型細(xì)胞質(zhì)雄性不育線粒體相關(guān)嵌合基因的發(fā)現(xiàn)[J];科學(xué)通報(bào);2002年02期

10 陳潛,汪迎春,張利明,李文彬,孫勇如;花藥特異嵌合啟動(dòng)子的構(gòu)建及雄性不育轉(zhuǎn)基因擬南芥的獲得[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2001年01期

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1 鄭奔;極性基因KANADI1調(diào)控?cái)M南芥營養(yǎng)生長階段轉(zhuǎn)變的機(jī)制研究[D];浙江農(nóng)林大學(xué);2015年

2 李杰;基于過表達(dá)策略驗(yàn)證煙草PVY抗性候選基因eIF4E的功能[D];牡丹江師范學(xué)院;2015年

3 雷雅琪;水稻生物鐘相關(guān)基因的功能預(yù)測(cè)分析及CSA節(jié)律性表達(dá)機(jī)理初步探討[D];寧夏大學(xué);2015年

4 劉誠誠;小麥VRN2基因功能分析及長日照促進(jìn)開花早期反應(yīng)基因的鑒定[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

5 李虎;水稻開花相關(guān)基因CDK系列基因的克隆[D];廣西大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2758243