【摘要】：細(xì)胞微載體通常是指能夠適用于貼壁依賴型細(xì)胞生長的微珠。用于制備細(xì)胞微載體的材料可以是天然高分子材料或人工合成高分子材料。細(xì)胞微載體由于具有較大的比表面積,因此為細(xì)胞提供了更大的生長面積,可以在較小的體積內(nèi)實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的大量生長和擴(kuò)增。國外早已將微載體成功用于實(shí)際生產(chǎn)之中,而我國對于微載體的開發(fā)相對較晚,走向商品化的微載體少之又少,相關(guān)產(chǎn)業(yè)所使用的微載體還只能主要依賴于進(jìn)口,價格昂貴。一些生物藥物、疫苗、抗體都需要從體外細(xì)胞內(nèi)大量的制備重組蛋白,然而細(xì)胞的生長需要微載體提供的這種生長界面,這必然使得以重組蛋白為原料的產(chǎn)品價格居高不下。細(xì)胞微載體在提高細(xì)胞產(chǎn)出率的同時也極大的提高了產(chǎn)品的成本,因此急需開發(fā)一種細(xì)胞微載體制備技術(shù)來降低產(chǎn)品成本。殼聚糖是一種性質(zhì)良好的天然高分子聚合物,價格低廉、來源廣泛,并具有良好的生物相容性,已經(jīng)在食品工業(yè)、生物醫(yī)藥等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。本文以殼聚糖為原材料,利用靜電滴注法制備了一種單分散型殼聚糖細(xì)胞微載體,克服了殼聚糖溶液的粘滯力和表面張力,以獲得粒徑均勻、球形度好的殼聚糖微球,并在此基礎(chǔ)上引入能夠與殼聚糖細(xì)胞微載體特異性結(jié)合的生長因子,進(jìn)一步增強(qiáng)微載體的生物學(xué)活性,使其能夠更好地滿足貼壁依賴型細(xì)胞生長的需求。為了獲得條件優(yōu)良的殼聚糖細(xì)胞微載體,本文在殼聚糖細(xì)胞微載體的制備過程中,對其制備工藝參數(shù)進(jìn)行了相應(yīng)的優(yōu)化,其中包括殼聚糖溶液濃度、針頭內(nèi)徑大小、電壓大小、加熱溫度等參數(shù)及在不同環(huán)境中的穩(wěn)定性等方面進(jìn)行了優(yōu)化,獲得了表面較光滑、半透明的殼聚糖細(xì)胞微載體,其粒徑分布在290~320μm左右,在121℃20min的常規(guī)高溫高壓滅菌條件下,連續(xù)高溫高壓5次并未產(chǎn)生形變,同時能夠在蒸餾水中長期保存,性質(zhì)穩(wěn)定。以上結(jié)果表明,通過靜電滴注法制備的殼聚糖細(xì)胞微載體,粒徑分布均勻、球形度良好,能夠利用常規(guī)方法滅菌,呈淡黃色半透明狀,細(xì)胞在其表面粘附、增殖后,可直接利用光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞的生長情況。對制備的殼聚糖細(xì)胞微載體進(jìn)行了理化性質(zhì)檢測之后,接下來利用基因工程技術(shù)制備了重組生長因子bFGF以及具有特異結(jié)合能力的重組生長因子ChtBD-bFGF用于殼聚糖細(xì)胞微載體,在生長因子末端引入能夠和材料特異結(jié)合的幾丁質(zhì)結(jié)合結(jié)構(gòu)域(ChtBD),使生長因子具有與材料特異結(jié)合的能力。純化后的bFGF濃度為:400μg/mL,ChtBD-bFGF濃度為:570μg/mL。最后利用濃度為40μg/mL的生長因子浸泡殼聚糖細(xì)胞微載體,以200μL/孔的微載體量和2萬/孔的細(xì)胞數(shù)量接種,在48孔板中培養(yǎng)小鼠成骨細(xì)胞系(MC3T3-E1)和小鼠胚胎成纖維細(xì)胞系(NIH3T3)。結(jié)果表明:MC3T3-E1細(xì)胞和NIH3T3細(xì)胞均能在其上良好的生長,ChtBD-bFGF能夠更好的促進(jìn)細(xì)胞在殼聚糖細(xì)胞微載體上的粘附和增殖,自制的殼聚糖細(xì)胞微載體可以用于上述兩種貼壁依賴型細(xì)胞的培養(yǎng)。
【學(xué)位授予單位】：長春理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：Q813
【圖文】：

聚氨葡糖和脫乙酰甲殼素等，是一種天然衍生的多萄糖胺和 N-乙酰葡萄糖胺組成，通過甲殼類動物而來，也存在于一些真菌細(xì)胞壁和昆蟲表皮中[36]。 55%以上的產(chǎn)物稱為殼聚糖。殼聚糖外觀一般為白，其脫乙酰度的高低及相對分子質(zhì)量的大小，是其參數(shù)。目前，殼聚糖的研究范圍十分廣泛，在環(huán)境保藥等方面都有著廣闊的應(yīng)用前景[37]。構(gòu)和性質(zhì)，甲殼素是自然界中發(fā)現(xiàn)的第二種最豐富的多糖。團(tuán)的纖維素（見圖 1.1），因此，甲殼素和殼聚糖是。氨基和羥基基團(tuán)的存在為修飾它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)提、化學(xué)和生物特性，包括溶解性[39]。

包括制球裝置的搭建、殼聚糖乙酸溶液的制備、接收相的制備、靜電滴注、以及固化成球。制備工藝流程如圖2.1 所示：圖 2.1 殼聚糖細(xì)胞微載體的制備流程圖（1） 構(gòu)建了一種殼聚糖細(xì)胞微載體靜電滴注裝置，該制備裝置的示意圖如圖 2.2所示，其中包括：（A）勻速推進(jìn)器；（B）靜電發(fā)生器；（C）步進(jìn)電機(jī)控制裝置；（D）溫控裝置。（2） 配制不同比例的殼聚糖乙酸溶液，充分混合均勻，完全溶解后靜置消泡，即可得到半透明的殼聚糖乙酸溶液。（3） 配制不同比例的氫氧化鈉乙醇溶液，充分?jǐn)嚢枞芙�，作為接收相。�?） 制球過程：步進(jìn)電機(jī)推進(jìn)器將殼聚糖乙酸溶液勻速的從針頭處擠出，擠出的

.3 殼聚糖細(xì)胞微載體的制備方案 殼聚糖原材料的選擇利用課題組采購的殼聚糖粉末，根據(jù)其具體參數(shù)條件及溶解后的形態(tài)，判斷用于制備微載體。 殼聚糖細(xì)胞微載體的制備流程殼聚糖細(xì)胞微載體的制備流程可以分為幾個主要部分，包括制球裝置的搭建乙酸溶液的制備、接收相的制備、靜電滴注、以及固化成球。制備工藝流程 所示：

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本文編號：2745220