【摘要】：谷胱甘肽(GSH)是細(xì)胞內(nèi)含量最多的非蛋白生物硫醇,在維持細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡起到了重要的作用,其濃度的異常會引發(fā)代謝、應(yīng)激、免疫等異常反應(yīng)。因此,找到簡便快捷的方法實(shí)時定量檢測活細(xì)胞內(nèi)GSH的含量變化對深入了解與GSH相關(guān)的病理事件至關(guān)重要。目前常用的定量檢測GSH的方法主要有兩種,細(xì)胞裂解液及GSH-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)計(jì)算方法、氧化還原敏感的熒光蛋白(roFPs)法。這兩種方法雖然可以對GSH進(jìn)行定量檢測,但均存在不足,前者無法達(dá)到實(shí)時有效的監(jiān)控GSH的濃度,后者存在還原型谷胱甘肽與氧化型谷胱甘肽的比例變化問題,使計(jì)算值存在偏差。與以上兩種方法相比,熒光探針法更適用于對生物體內(nèi)的GSH進(jìn)行定量檢測及實(shí)時監(jiān)測。已經(jīng)報道的基于邁克爾加成機(jī)理的熒光探針中,大多數(shù)只能對GSH定性檢測而無法定量及實(shí)時監(jiān)測,其原因?yàn)樘结樑cGSH量上不等的問題及實(shí)時檢測的實(shí)施策略,Kd值(解離平衡常數(shù))在可逆反應(yīng)中扮演著非常重要的角色,其大小與可逆反應(yīng)的親和力相關(guān),而可逆反應(yīng)的親和力應(yīng)適中,即最佳Kd值為3 mM。因此,通過調(diào)控邁克爾加成受體中雙鍵上的基團(tuán)構(gòu)筑邁克爾加成受體,以Kd值作為評價指標(biāo)。基于此,本文通過對所合成的五種化合物的比較,發(fā)現(xiàn)BODIPY、氰基、氫、酰胺基的組合來構(gòu)筑邁克爾加成反應(yīng)的受體GP-2,其更易于實(shí)現(xiàn)邁克爾加成-消除可逆反應(yīng),提高探針的靈敏度。這一探針的工作曲線線性系數(shù)高(R2=0.99),檢出限低,準(zhǔn)確度高,其與GSH反應(yīng)的Kd=3.44mM。利用該探針實(shí)現(xiàn)了 Hela細(xì)胞(海拉細(xì)胞)內(nèi)GSH的定量(5.29 mM),其值與之前所報道的Hela細(xì)胞中的GSH濃度數(shù)值非常接近,并通過與分子生物學(xué)研究中常用定量方法比較證明了熒光探針定量GSH方法的準(zhǔn)確性和可行性,為探索活細(xì)胞及或體內(nèi)的GSH提供了更加便捷的定量方法。
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：Q-33;O657.3
【圖文】：

基于PET的探針模型

圖１．２基于ＦＲＥＴ的探針模型逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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1 孟江平;徐強(qiáng);宋仲容;凌立新;周成合;;含苯并咪唑片段結(jié)構(gòu)的抗微生物藥物研究新進(jìn)展[J];中國抗生素雜志;2012年02期

本文編號：2726098