【摘要】：去整合素和金屬酶蛋白(A Disintegrin And Metalloprotease,ADAM)家族是一類膜錨定蛋白,由信號肽、前體蛋白、金屬蛋白酶域、去整合素域、半胱氨酸富集域、類表皮因子結(jié)構(gòu)域、跨膜域和胞質(zhì)尾區(qū)組成,目前發(fā)現(xiàn)三十四個成員,在人類和小鼠中ADAM蛋白在許多組織中廣泛表達。研究表明該蛋白家族成員參與了細胞與細胞,細胞與基質(zhì)之間的相互作用,涉及受精,神經(jīng)細胞發(fā)育以及腫瘤細胞遷移等生理過程。ADAM23是ADAM家族的成員之一,具有ADAM家族完全相似的結(jié)構(gòu),其蛋白大小約75kDa,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)廣泛表達。在1998年從鼠的細胞中克隆出ADAM23的同源基因,該基因表達的蛋白在人與鼠之間高度保守,隨之從人類基因組中克隆出ADAM23基因,對其蛋白序列進行分析表明該蛋白質(zhì)缺乏金屬蛋白酶活性而去整合素結(jié)構(gòu)域高度保守,說明其功能可能是作為細胞表面受體與整合素相結(jié)合。文獻報道ADAM23基因?qū)Υ竽X發(fā)育有著重要影響,在神經(jīng)元的遷移與伸長到運動與感知系統(tǒng)的功能中均扮演了一定的角色,ADAM23敲除小鼠表現(xiàn)出癲癇癥狀。同時ADAM23基因的沉默對各種癌癥的發(fā)生也有著密切關(guān)聯(lián),其與整合素的結(jié)合復合物能夠改變細胞粘附力,該功能的缺失影響到癌細胞的遷移與分化。但這些研究大部分是在細胞水平進行,在體內(nèi)研究較少,尤其是該基因?qū)Π唏R魚胚胎的發(fā)育過程的影響還沒有報道。斑馬魚為脊椎動物,與人器官在結(jié)構(gòu)、生理和分子水平等都極其相似,其胚胎呈透明狀,可以觀察內(nèi)部器官和系統(tǒng)的發(fā)育情況,非常適合作為研究發(fā)育過程的模式生物。通過BLAST人源氨基酸序列確定了在斑馬魚中該基因只有一個同源序列adam23a,有很高的保守性,保守性為75%,且在斑馬魚胚胎多達17種組織器官中均表達。目前對ADAM23基因在斑馬魚中的研究比較少,僅有報道該基因表達蛋白作為與LGI1結(jié)合的受體,兩者相互作用調(diào)節(jié)突觸傳遞的強度,暗示著ADAM23參與了大腦的發(fā)育及復雜功能。因而對于該基因除了其受體作用,其在斑馬魚發(fā)育過程中是否有其他重要影響,這都是未知的。本課題選擇斑馬魚為實驗動物,通過顯微注射技術(shù)將ADAM23-W mRNA和mCherry mRNA為對照注射進斑馬魚1-2細胞期的胚胎,收集各發(fā)育時期的胚胎,再用整體原位雜交技術(shù)觀察高表達ADAM23后各組織標志性基因的表達是否有差異。我們重點研究了ADAM23基因是否對斑馬魚胚胎骨骼,肌肉,神經(jīng)系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)發(fā)育的影響。我們在每種組織中選擇多個發(fā)育標志性基因的探針來檢測其發(fā)育狀態(tài),包括肌肉標志基因mlc2f,smyhc1,myf5和mef2ca和myogenin骨骼標志基因sox9a,osterix,dlx2a和col1a1a,神經(jīng)發(fā)育標記基因eve1,elavl3,shha,krox20和neurog1以及血管標志基因etsrp,fli 1,cmyb和runx1。原位雜交結(jié)果顯示該基因?qū)Π唏R魚的肌肉標志基因myogenin、骨骼標志基因dlx2a和col1oala和神經(jīng)系統(tǒng)標志基因neurog1的表達量均有影響且均呈現(xiàn)上調(diào)作用,這些結(jié)果表明ADAM23基因可能參與了斑馬魚肌肉、骨骼及神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育過程,對斑馬魚胚胎發(fā)育有重要調(diào)控作用。我們的結(jié)果首次發(fā)現(xiàn)ADAM23基因調(diào)控斑馬魚胚胎發(fā)育,尤其是對肌肉、骨骼及神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育具有重要作用。
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：S917.4
【圖文】：

的過程（圖片參考于文獻[10]）。A 是神經(jīng)突，C 是神經(jīng)突腔化形成神經(jīng)管enesis of neuronal primordium[10].Akeel and C is neural rod .進入快速成熟階段，神經(jīng)原節(jié)沿為端腦（telencephalon），間腦呈箭頭形的是正在發(fā)育的眼原基[基一起擴張，而松果體（epiphys中腦原基水平分裂形成背側(cè)中腦中-后腦邊界區(qū)域顯著，底板從也由腦和脊索外側(cè)遷移發(fā)育，隨聽覺原基覆蓋于后腦以及與視覺

圖 2.4.2 pCS2+-ADAM23-W 質(zhì)粒圖譜Fig.2.4.2 Map of pCS2+-ADAM23-W plasmid2.4.3 制備 mRNA（1）將測序正確的質(zhì)粒進行線性化，選取 NotⅠ為酶切位點，酶切體系如下：10×H 4 μL0.1%BSA 1 μL0.1%Trion X-100 4 μLNotⅠ enzyme 4 μL質(zhì)粒 2 ngddH2O 補至 40 μL吹打混勻后放在 37℃恒溫培養(yǎng)箱酶切 6 小時；

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本文編號：2724526