【摘要】：細胞凋亡是當前生命科學的研究熱點之一,對有關疾病產生細胞凋亡機制的深入了解有助于重大疾病的防治和治療。細胞色素c(Cyt c)是一種血紅素蛋白,在細胞凋亡過程中起著至關重要的作用。另一方面,近些年來表面增強拉曼光譜(SERS)在蛋白質檢測領域顯示出了巨大的應用潛力。本論文通過鎳納米線(Ni NWs)和拉曼光譜(共振拉曼和SERS)聯(lián)用研究了氧化還原態(tài)依賴的Cyt c與心磷脂膜間的相互作用,并建立了非標記快速檢測凋亡細胞的SERS方法。主要研究內容和成果包括:1.Ni NWs的合成及其對Cyt c的特異性還原作用(1)以水合肼還原法制備了不同粒徑的Ni NWs,發(fā)現(xiàn)其對Cyt c的特異性還原的特性,并發(fā)現(xiàn)了此還原反應的粒徑、溫度和PH依賴性。(2)考察了Ni NWs對血紅素蛋白還原作用的選擇性,發(fā)現(xiàn)Ni NWs能夠特異性還原Cyt c。反應過程中電子直接從Ni NWs傳遞給Fe~(3+)Cyt c,并產生鎳離子。2.Ni NWs和共振拉曼(RR)光譜聯(lián)用研究Cyt c和心磷脂膜間的相互作用(1)利用了旋蒸法獲得了CL和PC/PE/CL混合脂質體,利用RR光譜分別探究了Fe~(3+)Cyt c、Fe~(2+)Cyt c與類線粒體膜PC/PE/CL混合脂質體間的相互作用,發(fā)現(xiàn)心磷脂脂質膜和Cyt c間的相互作用是Cyt c氧化還原態(tài)依賴的。(2)利用紫外可見(UV-Vis)光譜考察了磷脂膜和Cyt c結合后誘導的過氧化物酶活性,發(fā)現(xiàn)Fe~(2+)Cyt c-磷脂膜復合物的過氧化物酶活性明顯高于Fe~(3+)Cyt c-磷脂膜復合物,表明在細胞凋亡的啟動階段,Fe~(2+)Cyt c可能比Fe~(3+)Cyt c起了更重要的作用。3.Ni NWs和SERS聯(lián)用檢測凋亡線粒體Cyt c的釋放(1)用放線菌素D誘導HeLa細胞凋亡,并提取線粒體。Ni NWs和RR拉曼光譜聯(lián)用檢測凋亡細胞線粒體釋放的Cyt c,并利用750 cm-1處特征峰的相對強度變化建立了Cyt c氧化還原態(tài)含量的檢測方法。(2)將銀(Ag)納米粒子引入檢測體系,發(fā)現(xiàn)Fe~(2+)Cyt c與Ag作用后轉變成Fe~(3+)Cyt c,釋放的Cyt c總量可以利用SERS確定。通過銀的拉曼信號增強作用,大大提高了最低檢出濃度,從而建立了一種非標記快速直接檢測凋亡細胞線粒體釋放的Cyt c總量的SERS方法。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：O657.37;TB383.1;Q2-33
【圖文】：

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