【摘要】：細(xì)胞凋亡是當(dāng)前生命科學(xué)的研究熱點之一,對有關(guān)疾病產(chǎn)生細(xì)胞凋亡機(jī)制的深入了解有助于重大疾病的防治和治療。細(xì)胞色素c(Cyt c)是一種血紅素蛋白,在細(xì)胞凋亡過程中起著至關(guān)重要的作用。另一方面,近些年來表面增強(qiáng)拉曼光譜(SERS)在蛋白質(zhì)檢測領(lǐng)域顯示出了巨大的應(yīng)用潛力。本論文通過鎳納米線(Ni NWs)和拉曼光譜(共振拉曼和SERS)聯(lián)用研究了氧化還原態(tài)依賴的Cyt c與心磷脂膜間的相互作用,并建立了非標(biāo)記快速檢測凋亡細(xì)胞的SERS方法。主要研究內(nèi)容和成果包括:1.Ni NWs的合成及其對Cyt c的特異性還原作用(1)以水合肼還原法制備了不同粒徑的Ni NWs,發(fā)現(xiàn)其對Cyt c的特異性還原的特性,并發(fā)現(xiàn)了此還原反應(yīng)的粒徑、溫度和PH依賴性。(2)考察了Ni NWs對血紅素蛋白還原作用的選擇性,發(fā)現(xiàn)Ni NWs能夠特異性還原Cyt c。反應(yīng)過程中電子直接從Ni NWs傳遞給Fe~(3+)Cyt c,并產(chǎn)生鎳離子。2.Ni NWs和共振拉曼(RR)光譜聯(lián)用研究Cyt c和心磷脂膜間的相互作用(1)利用了旋蒸法獲得了CL和PC/PE/CL混合脂質(zhì)體,利用RR光譜分別探究了Fe~(3+)Cyt c、Fe~(2+)Cyt c與類線粒體膜PC/PE/CL混合脂質(zhì)體間的相互作用,發(fā)現(xiàn)心磷脂脂質(zhì)膜和Cyt c間的相互作用是Cyt c氧化還原態(tài)依賴的。(2)利用紫外可見(UV-Vis)光譜考察了磷脂膜和Cyt c結(jié)合后誘導(dǎo)的過氧化物酶活性,發(fā)現(xiàn)Fe~(2+)Cyt c-磷脂膜復(fù)合物的過氧化物酶活性明顯高于Fe~(3+)Cyt c-磷脂膜復(fù)合物,表明在細(xì)胞凋亡的啟動階段,Fe~(2+)Cyt c可能比Fe~(3+)Cyt c起了更重要的作用。3.Ni NWs和SERS聯(lián)用檢測凋亡線粒體Cyt c的釋放(1)用放線菌素D誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡,并提取線粒體。Ni NWs和RR拉曼光譜聯(lián)用檢測凋亡細(xì)胞線粒體釋放的Cyt c,并利用750 cm-1處特征峰的相對強(qiáng)度變化建立了Cyt c氧化還原態(tài)含量的檢測方法。(2)將銀(Ag)納米粒子引入檢測體系,發(fā)現(xiàn)Fe~(2+)Cyt c與Ag作用后轉(zhuǎn)變成Fe~(3+)Cyt c,釋放的Cyt c總量可以利用SERS確定。通過銀的拉曼信號增強(qiáng)作用,大大提高了最低檢出濃度,從而建立了一種非標(biāo)記快速直接檢測凋亡細(xì)胞線粒體釋放的Cyt c總量的SERS方法。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：O657.37;TB383.1;Q2-33
【圖文】：

圖003001000，2001400，舊00Raman‘h袱傳m一，)

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本文編號：2723939