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核酸—金屬納米粒子在細(xì)胞成像分析中的研究

發(fā)布時(shí)間:2020-06-07 18:29
【摘要】:納米材料由于其獨(dú)特的性質(zhì),在各個(gè)領(lǐng)域已經(jīng)引起了人們的關(guān)注。其中,貴金屬納米粒子因其良好的物理化學(xué)性質(zhì)和生物相容性在生化傳感、生物成像和生物監(jiān)測(cè)等方面得到廣泛開(kāi)發(fā)和利用。利用局部表面等離子共振效應(yīng)、量子尺寸效應(yīng)和貴金屬納米粒子的表面特征,結(jié)合高靈敏度的暗場(chǎng)成像技術(shù),對(duì)于細(xì)胞內(nèi)生物過(guò)程的分析和檢測(cè)有極其重要的意義,對(duì)相關(guān)疾病的發(fā)現(xiàn)、診斷和治療都提供了很好的思路,也表明該方向在分析化學(xué)領(lǐng)域有巨大的研究前景;诖,本論文對(duì)金納米顆粒進(jìn)行了不對(duì)稱(chēng)修飾,構(gòu)建了一系列穩(wěn)定的、性能良好的定向修飾探針,并對(duì)其特性和在生物分子中的應(yīng)用進(jìn)行了探究,主要研究?jī)?nèi)容如下:1.基于活化等離子體金納米粒子二聚體對(duì)細(xì)胞表面銅離子HER2蛋白的暗場(chǎng)原位成像分析:將AuNPs單體作為探針,在修飾后和目標(biāo)結(jié)合,將會(huì)形成具有更高散射效率的可見(jiàn)等離子體二聚體。AuNPs二聚體是在水溶液中通過(guò)Cu~+催化疊氮化物和炔烴分別改性的AuNPs之間的點(diǎn)擊反應(yīng)形成的。將Au_1-N_3和Au_2-C≡C注入樣品后,構(gòu)建了大鼠血漿細(xì)胞中銅離子的暗場(chǎng)原位成像。為了對(duì)生物分子進(jìn)行特異性檢測(cè),我們構(gòu)建了DNA1/Au_1-N_3探針和Anti-HER2/Au_2-C≡C探針,通過(guò)暗場(chǎng)成像對(duì)細(xì)胞上的HER2蛋白進(jìn)行檢測(cè)。Anti-HER2修飾的Au_2-C≡C可以特異性識(shí)別HER2蛋白,在靶蛋白上形成有效的LSPR區(qū)。通過(guò)控制滾圈擴(kuò)增(RCA)產(chǎn)物與HER2蛋白特異性適配體的表達(dá)區(qū)匹配,DNA1/Au_1-N_3與RCA產(chǎn)物雜交,并且通過(guò)點(diǎn)擊反應(yīng)與Anti-HER2/Au_2-C≡C連接,從而得到了一種高效的可見(jiàn)等離子體聚合物。2.基于四嗪/反式環(huán)辛烯環(huán)加成反應(yīng)AuNPs聚合物對(duì)目標(biāo)物的定量可視化測(cè)試和細(xì)胞內(nèi)的暗場(chǎng)原位成像:為了特異性識(shí)別ATP,選擇設(shè)計(jì)的DNA1(含有ATP適體序列)作為捕獲探針附著在磁珠(MB)上。MB/DNA1/DNA2/Au_1-(E)cyclooctene探針(MB/Au_1)由DNA1/DNA2雜交構(gòu)成。同時(shí),這些MB/Au_1結(jié)構(gòu)形成空間位阻,以避免Au1上的-(E)cyclooctene與Au3上的-N_4之間的接觸。DNA1與ATP結(jié)合后,DNA2/Au_1-(E)cyclooctene從MB/Au_1探針中釋放出來(lái),可與Au_3-N_4探針?lè)磻?yīng)生成AuNPs聚合物,導(dǎo)致AuNPs彼此接近并且顏色從粉紅色變?yōu)榛疑赃M(jìn)行視覺(jué)量化。通過(guò)該策略,通過(guò)使用暗場(chǎng)顯微鏡,AuNPs的散射點(diǎn)顏色從綠色(AuNPs monmer)變?yōu)槌燃t色(AuNPs polymer)。該策略將廣泛用于生物成像和分析中納米粒子的鑒定和測(cè)定。3.基于可生物降解的MnO_2納米片的DNA酶的再循環(huán)擴(kuò)增——靈敏檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)微小RNA:構(gòu)建了一種多功能細(xì)胞信號(hào)放大方法,將可生物降解的MnO_2納米片與靶觸發(fā)的DNA酶循環(huán)擴(kuò)增整合在一個(gè)納米系統(tǒng)中,設(shè)計(jì)用于活細(xì)胞中microRNA的高度特異性和靈敏的成像分析?傊,本文將納米材料和成像技術(shù)結(jié)合起來(lái)將分析檢測(cè)研究放到納米尺度上進(jìn)行,能夠?qū)崿F(xiàn)活體內(nèi)生物分子的靈敏性和特異性檢測(cè),這對(duì)今后癌癥的發(fā)現(xiàn)和治療有重要意義,為以后的研究提供理論基礎(chǔ)和方向。
【圖文】:

示意圖,示意圖,表面等離子共振,自由電子


尺寸效應(yīng)粒尺寸下降到某一值,則納米半導(dǎo)體粒子具有不連續(xù)的最高占能級(jí)而造成隙變寬[40]。利用納米顆粒的量子尺寸效應(yīng)可以增強(qiáng)點(diǎn)已廣泛應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域[41-42]。表面等離子共振效應(yīng)屬和半導(dǎo)體表面存在很多自由電子,這些自由電子會(huì)組成自由團(tuán)就被稱(chēng)為表面等離子體[43]。在外界電磁場(chǎng)和庫(kù)侖力的作用電荷周?chē)鐾鶑?fù)振蕩,,如圖 1-1,當(dāng)外界作用頻率等于金屬納率時(shí),就會(huì)發(fā)生局部表面等離子共振 ( Localized Surface Pla

吸收光譜,吸收光譜,散射光譜,納米粒子


異性結(jié)合進(jìn)行檢測(cè)。影響當(dāng)球形納米粒子的尺寸小于 20 nm 時(shí),顆粒尺寸增大并且由于大顆粒的納米粒子與外部電磁場(chǎng)有更大的輻射耦合,當(dāng)粒徑增加時(shí),散射光譜也有助于消光光譜。當(dāng)球形納米尺寸增加,吸收光譜和散射光譜都會(huì)發(fā)生紅移,而且譜帶影響納米顆粒對(duì)局部等離子體共振也有不同的影響,并且納米上只有一個(gè)峰,而納米棒有兩種極化模式,因此產(chǎn)生兩個(gè)金納米棒(實(shí)線)和 22 nm 的納米球(虛線)的吸收光譜。
【學(xué)位授予單位】:山東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類(lèi)號(hào)】:Q2-33;O657.3

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本文編號(hào):2701829

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