【摘要】：現(xiàn)代生活中人們遭遇到各種應(yīng)激性事件時,機體內(nèi)的下丘腦-垂體-腎上腺軸會被激活,促使腎上腺釋放一種重要的糖皮質(zhì)激素——皮質(zhì)醇(嚙齒動物中主要是皮質(zhì)酮)。慢性應(yīng)激會誘導(dǎo)糖皮質(zhì)激素的持續(xù)釋放并且引起許多嚴重的健康問題,例如情緒障礙,心血管疾病和自身免疫疾病等。許多研究表明皮質(zhì)酮的神經(jīng)毒性作用是通過增加氧化應(yīng)激和細胞凋亡介導(dǎo)的。盡管已有研究證實SIRT1能夠通過啟動自噬從而對氧化應(yīng)激和DNA損傷起到保護作用,但它和自噬在皮質(zhì)酮誘導(dǎo)的應(yīng)激中的作用還需進一步研究。本研究首先利用不同濃度的皮質(zhì)酮對脊髓前角運動神經(jīng)元瘤細胞進行不同時間的處理,通過CCK-8檢測細胞活力以確定最佳的處理條件,從而建立細胞應(yīng)激模型。然后,通過轉(zhuǎn)染過表達和敲減質(zhì)粒調(diào)控細胞內(nèi)SIRT1的表達水平,同時利用免疫印跡,熒光定量PCR等方法檢測皮質(zhì)酮處理后細胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白的表達情況,從而檢測SIRT1在細胞應(yīng)激條件下是如何調(diào)控自噬的。我們還利用TUNEL染色,檢測SIRT1過表達細胞在皮質(zhì)酮處理后的細胞凋亡水平,從而明確SIRT1在應(yīng)激條件下對細胞凋亡的影響作用。我們的研究發(fā)現(xiàn)隨著皮質(zhì)酮濃度的增加,細胞活力逐漸下降,SIRT1和LC3BⅡ/Ⅰ的水平分別呈現(xiàn)劑量依賴性降低和增加。而SIRT1過表達可以抑制皮質(zhì)酮誘導(dǎo)的自噬并且促進細胞凋亡。抑制SIRT1的表達則可以促進皮質(zhì)酮誘導(dǎo)的自噬水平。這些發(fā)現(xiàn)能夠幫助我們更好的了解SIRT1和自噬在慢性應(yīng)激中發(fā)揮的作用。
【圖文】：

３．３過表達ＳＩＲＴ１能夠抑制皮質(zhì)酮引起的自噬逡逑為了確定皮質(zhì)酮處理引起的ＳＩＲＴ１下調(diào)和自噬啟動之間的關(guān)系，我們首先構(gòu)逡逑建了邋ＳＩＲＴ１過表達和敲減體系。如ＷｅｓｔｅｍＢｌｏｔ結(jié)果顯示（圖３Ａ，邋３Ｂ），在轉(zhuǎn)染了逡逑過表達質(zhì)粒后，ＳＩＲＴ１的表達水平增加了兩倍以上（圖３Ｃ）。我們又構(gòu)建了兩種不逡逑同的ＳＩＲＴ１特異性ｓ＿Ａ，其中一種能夠顯著降低ＳＩＲＴ１的表達豐度，并被選擇逡逑用于隨后的實驗（圖３Ｄ）。逡逑細胞轉(zhuǎn)染相應(yīng)質(zhì)粒２４ｈ后，在含２００邐皮質(zhì)酮的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)２４ｈ，隨逡逑后提取蛋白并用于免疫印跡實驗（圖４Ａ，５Ａ）。和我們之前的實驗結(jié)果一致，皮逡逑質(zhì)酮處理可以顯著降低ＳＩＲＴ１的表達并且增加ＬＣ３ＢＭ的水平（圖４Ｂ，，４Ｃ）。而逡逑過表達ＳＩＲＴ１可以將自噬恢復(fù)到正常的水平（圖４Ｃ）。皮質(zhì)酮處理和ＳＩＲＴ１過表逡逑達都沒有影響Ａｔｇ５的表達（圖４Ｄ）。雖然皮質(zhì)酮的加入顯著增加了邋ｐ６２的表徸，逡逑但ＳＩＲＴ１過表達質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染卻沒有進一步改變該蛋白的水平，表明ＳＩＲＴ１可能對逡逑自噬體的降解沒有影響。逡逑２０逡逑

用于隨后的實驗（圖３Ｄ）。逡逑細胞轉(zhuǎn)染相應(yīng)質(zhì)粒２４ｈ后，在含２００邐皮質(zhì)酮的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)２４ｈ，隨逡逑后提取蛋白并用于免疫印跡實驗（圖４Ａ，５Ａ）。和我們之前的實驗結(jié)果一致，皮逡逑質(zhì)酮處理可以顯著降低ＳＩＲＴ１的表達并且增加ＬＣ３ＢＭ的水平（圖４Ｂ，４Ｃ）。而逡逑過表達ＳＩＲＴ１可以將自噬恢復(fù)到正常的水平（圖４Ｃ）。皮質(zhì)酮處理和ＳＩＲＴ１過表逡逑達都沒有影響Ａｔｇ５的表達（圖４Ｄ）。雖然皮質(zhì)酮的加入顯著增加了邋ｐ６２的表徸，逡逑但ＳＩＲＴ１過表達質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染卻沒有進一步改變該蛋白的水平，表明ＳＩＲＴ１可能對逡逑自噬體的降解沒有影響。逡逑２０逡逑
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R338

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 范琳犀;楊玉潔;姜寧;陳遠偉;劉新民;王瓊;;皮質(zhì)酮誘導(dǎo)小鼠抑郁伴發(fā)的學(xué)習(xí)記憶損傷[J];中國比較醫(yī)學(xué)雜志;2018年04期

2 趙玉男;戴建國;王中立;陳琳;黃玉芳;;長期皮質(zhì)酮注射對C57BL/6N小鼠海馬膠質(zhì)纖維酸性蛋白水平的影響[J];中國病理生理雜志;2010年10期

3 楊春星,張杰,王健,李歐,冀鵬,李怡凡,范少光;不同年齡小鼠血漿皮質(zhì)酮對腹腔注射白細胞介素-1β的反應(yīng)[J];北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2000年04期

4 熊忠,索有瑞;血漿和組織中皮質(zhì)酮的熒光測定法[J];光譜學(xué)與光譜分析;1998年02期

5 張少英,陶才美,戴雁峰;特異性免疫皮質(zhì)酮提高肉雞生長速度[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);1988年02期

6 黃孝玢;張琦;李建中;張成員;謝進;高中雙;;特異性免疫皮質(zhì)酮對愛撥益加肉雞增重和降低脂肪的試驗[J];西南民族學(xué)院學(xué)報(畜牧獸醫(yī)版);1988年01期

7 查良倫;沈自尹;張曉峰;張萍;施鳳英;黃士通;費紹華;;生地對家兔糖皮質(zhì)激素受抑模型的實驗研究[J];中西醫(yī)結(jié)合雜志;1988年02期

8 張少英,汪琳仙,陳育新,楊淑華,吳武干,梁華;皮質(zhì)酮免疫對北京鴨某些生產(chǎn)性能的影響[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;1989年S1期

9 李柏青,楊貴貞;新生期去胸腺對神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的影響[J];白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1989年05期

10 李經(jīng)才;;側(cè)腦室及下丘腦注射人參皂甙對大鼠皮質(zhì)酮分泌的影響[J];四川生理科學(xué)雜志;1989年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 胡家慶;殷明;章建程;徐靈活;趙敏;竺青;王曉花;余浩;郭俊生;;酪氨酸干預(yù)對皮質(zhì)酮致原代培養(yǎng)多巴胺神經(jīng)元損傷的保護作用[A];上海市預(yù)防醫(yī)學(xué)會第二屆學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

2 趙玉男;;通過反復(fù)注射皮質(zhì)酮制備小鼠抑郁模型[A];藥學(xué)發(fā)展前沿論壇及藥理學(xué)博士論壇論文集[C];2008年

3 陳琳;王昕;戴建國;黃玉芳;趙玉男;;人參總皂苷對皮質(zhì)酮致小鼠海馬星形膠質(zhì)細胞結(jié)構(gòu)可塑性損傷和海馬萎縮的保護作用[A];第二屆國際抑郁共病暨第十二屆中國中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)理論學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2016年

4 匡培梓;胡家芬;隋南;管林初;;胚胎期光照和皮質(zhì)酮對改善暗孵化雛雞記憶的作用機理[A];第九屆全國心理學(xué)學(xué)術(shù)會議文摘選集[C];2001年

5 王瑩;馮星;;外源性褪黑素對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷應(yīng)激中血漿促腎上腺皮質(zhì)激素和皮質(zhì)酮的影響[A];2006（第三屆）江浙滬兒科學(xué)術(shù)會議暨浙江省兒科學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

6 趙玉男;戴建國;王中立;陳琳;黃玉芳;;長期皮質(zhì)酮注射對C57BL/6N小鼠海馬膠質(zhì)纖維酸性蛋白水平的影響[A];中國病理生理學(xué)會第九屆全國代表大會及學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2010年

7 劉沖;蔣春雷;;皮質(zhì)酮對大鼠腹腔肥大細胞分泌組胺的非基因組調(diào)節(jié)作用[A];中國生理學(xué)會2004年消化內(nèi)分泌生殖學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2004年

8 翟學(xué)佳;陳芬;朱超然;呂永寧;;HPLC-MS/MS測定抑郁模型大鼠血漿中皮質(zhì)酮的濃度[A];2015年全國醫(yī)院藥學(xué)（藥學(xué)監(jiān)護）學(xué)術(shù)會議論文集[C];2015年

9 鐘河江;周建云;蔣建新;王海燕;楊策;嚴軍;劉慶;程英;;X盒結(jié)合蛋白1在低濃度皮質(zhì)酮對巨噬細胞免疫功能調(diào)控中的作用[A];第七屆全國創(chuàng)傷學(xué)術(shù)會議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)論壇論文匯編[C];2009年

10 鐘河江;蔣建新;王海燕;楊策;張沖;嚴軍;劉慶;黃蘇娜;;皮質(zhì)酮誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的作用[A];第七屆全國創(chuàng)傷學(xué)術(shù)會議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)論壇論文匯編[C];2009年

相關(guān)重要報紙文章 前5條

1 張俊杰;爬山要講科學(xué)[N];大眾衛(wèi)生報;2004年

2 秦紅群;癌癥 愛纏情緒差的人[N];衛(wèi)生與生活報;2007年

3 張?zhí)锟?用藥物“擦掉”人腦中的壞記憶[N];大眾科技報;2009年

4 王素霞;孤獨催人老[N];保健時報;2005年

5 楊振剛;情緒對癌癥發(fā)生及康復(fù)的影響[N];光明日報;2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 譚秀文;CRH和皮質(zhì)酮影響小鼠著床前胚胎發(fā)育的機制：體外模型研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

2 李棟;LW-AFC及其活性成分對皮質(zhì)酮致突觸可塑性損傷的保護作用及機制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2017年

3 李晏;應(yīng)激大鼠條件性位置偏愛及伏隔核多巴胺機制的皮質(zhì)酮調(diào)節(jié)通路研究[D];中南大學(xué);2006年

4 朱澤華;電針結(jié)合淫羊藿總黃酮對外源性皮質(zhì)酮引起大鼠海馬損傷的影響及機制[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

5 馮昊;高血漿皮質(zhì)酮下調(diào)大鼠海馬BDNF基因表達的機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

6 宋清;調(diào)肝方藥對皮質(zhì)酮、谷氨酸致PC12細胞損傷模型的保護效應(yīng)及機制研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2007年

7 何芳;心理應(yīng)激致肝鐵蓄積的機制探討[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

8 鄧瓊;垂體促腎上腺皮質(zhì)激素細胞的糖皮質(zhì)激素快速反饋機制研究[D];吉林大學(xué);2014年

9 王國華;抗抑郁藥物的神經(jīng)可塑性促進作用及機制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

10 劉寶君;淫羊藿苷對皮質(zhì)酮誘導(dǎo)的原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元損傷的保護作用及其機制探討[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 姜羽婷;SIRT1在皮質(zhì)酮誘導(dǎo)的細胞應(yīng)激模型中調(diào)控自噬的機制研究[D];浙江大學(xué);2019年

2 鄒夢娟;營養(yǎng)不良對大鼠膿毒癥早期血漿ACTH及皮質(zhì)酮的影響[D];中國醫(yī)科大學(xué);2019年

3 李天;有氧運動對衰老大鼠血清中的皮質(zhì)酮和腎上腺CYP19A1和VDR表達的影響[D];吉林大學(xué);2019年

4 李響;急性皮質(zhì)酮給藥對中縫核—海馬通路內(nèi)5-HT神經(jīng)傳導(dǎo)的作用[D];中國醫(yī)科大學(xué);2018年

5 譚謙;大黃素甲醚調(diào)控BDNF-TrkB通路拮抗皮質(zhì)酮對PC12細胞的損傷作用研究[D];西南交通大學(xué);2018年

6 王瓊;Reelin-dab1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在鋁致Aβ代謝異常中的作用及其機制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2018年

7 丁芹;鋅受體GPR39對皮質(zhì)酮致海馬HT-22細胞損傷的保護作用及機制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2017年

8 郭亞鵬;豆腐果苷通過ERK1/2信號通路對皮質(zhì)酮致PC12細胞損傷的保護作用[D];皖南醫(yī)學(xué)院;2017年

9 王俊;皮質(zhì)酮預(yù)處理對脂多糖激活小膠質(zhì)細胞的調(diào)節(jié)作用及雞豆黃素A的保護作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2017年

10 李萌;PKC介導(dǎo)皮質(zhì)酮誘發(fā)大鼠胃特異性背根節(jié)神經(jīng)元敏化的機制研究[D];蘇州大學(xué);2017年

本文編號：2695793