發(fā)布時間：2020-05-16 11:05

【摘要】：古細(xì)菌(Archara)又被稱之為古生菌。它們與原核生物既有很多的相似之處,同時也擁有真核生物的某些特征。古菌分兩大類,廣古菌(Euryarchaeota)以及泉古菌(Crenarchaeota)。古嘌苷(Archaeosine,G+)是在古菌tRNA中被發(fā)現(xiàn)的一種高度修飾的核苷。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),在泉古菌中參與古嘌苷合成途徑中的QueF-like酶與細(xì)菌的QueF酶具有同源性。人們在細(xì)菌中克隆了 QueF基因,并且通過對QueF的催化活性的研究,發(fā)現(xiàn)了 QueF具有腈類還原酶活性。而腈類還原酶具有良好的應(yīng)用前景。因此研究來自泉古菌的QueF-like酶的活性也具有重要意義。根據(jù)報道,帶有β-tail的融合蛋白可以在細(xì)菌中表達(dá),與β折疊纖維化短肽混合時,可以共同誘導(dǎo)組裝成納米纖維結(jié)構(gòu),進(jìn)而提高酶的催化效率及穩(wěn)定性。所以本實(shí)驗選取泉古菌Pvrobaculum calidifontis的QueF-like基因,在其C-端加上β-tail的編碼序列,由大連的寶生物公司合成全序列。本研究通過基因重組技術(shù),把已合成的全序列從pUC-19中切除,然后插入到載體pET-28a上,重新構(gòu)建了重組表達(dá)載體pET-28a-QueF-Like-β-tail,然后在大腸桿菌中對帶有β-tail的QueF-like酶蛋白進(jìn)行了表達(dá),并對其進(jìn)行了純化。SDS-PAGE電泳檢測表示,目的蛋白已成功表達(dá)。此研究為后續(xù)的QueF-like酶的納米纖維的組裝打下了基礎(chǔ)。
【圖文】：

圖２喹啉的生物合成途徑中ＱｕｅＦ的腈類還原酶活性［ｗ逡逑＇７０１逡逑

圖４ｐＵＣ－ｌ９質(zhì)粒圖譜［２２］逡逑Ｆｉｇ４邋Ｔｈｅ邋ｐｌａｓｍｉｄ邋ｐｒｏｆｉｌｅｓ邋ｏｆ邋ｐＥＴ－２８ａ邋（邋＋邋）邋Ｃ２２］逡逑（２）邋ｐＥＴ－２８ａ邋（邋＋邋）質(zhì)粒為本實(shí)驗室所保存的通用表達(dá)載體，由Ｎｏｖａｇｅｎ公司逡逑
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：Q78

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王劍飛;申之義;;反芻動物瘤胃內(nèi)古菌的研究進(jìn)展[J];畜牧與飼料科學(xué);2010年02期

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本文編號：2666641