發(fā)布時間：2020-04-11 06:15

【摘要】：鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium)是一種人畜共患病腸道致病細菌,可引起腸胃炎、傷寒、痢疾等疾病。由鼠傷寒沙門氏菌引起的病例全球可見,分布廣泛,特別是在貧困地區(qū),由其感染造成的發(fā)病率和死亡率更是高居不下,給人類生活健康造成極大威脅,而形成細菌菌膜是其感染難以根除的主要原因之一。菌毛是細菌表面的一些絲狀附屬物,其在病原菌感染機體形成菌膜的初始黏附,菌膜發(fā)展甚至細菌間的信號傳遞等過程中均有重要作用。適配體是能與靶標(biāo)特異性結(jié)合的寡核酸片段,其在靶向給藥治療細菌或細菌菌膜感染等方面有極大應(yīng)用前景,因此,本文以鼠傷寒沙門氏菌菌毛蛋白為靶標(biāo),篩選其特異性適配體,為靶向治療細菌或細菌菌膜感染奠定基礎(chǔ)。此外,為進一步探究菌毛影響菌膜發(fā)展的分子機制,以菌毛蛋白為抗原,制備其多克隆抗體。具體工作如下:(1)FimA蛋白是鼠傷寒沙門氏菌Ⅰ型菌毛的主要結(jié)構(gòu)單位,對實現(xiàn)其菌毛的功能有重要意義。本實驗通過構(gòu)建pET-28a-fimA重組質(zhì)粒,將重組質(zhì)粒導(dǎo)入表達細菌,并成功誘導(dǎo)表達。經(jīng)純化濃縮,得到純度較高的重組蛋白FimA,用Bradford法測得其濃度為1.594 mg/mL,達到后續(xù)實驗要求。(2)適配體(Aptamer)是經(jīng)指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進化技術(shù)(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)篩選得到的,與靶標(biāo)具有高親和力與特異性結(jié)合能力的寡核酸片段。本部分以鼠傷寒沙門氏菌菌毛蛋白FimA為靶標(biāo),篩選得到其特異性適配體。經(jīng)驗證分析,篩選得到的適配體對靶標(biāo)菌具有較強的親和力,達到29.8±7.88 nM,且具有較好的特異性。(3)本部分以純化的鼠傷寒沙門氏菌菌毛蛋白FimA為抗原,免疫3只小鼠,得到其多克隆抗體。經(jīng)間接酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)實驗測其抗血清效價,其中兩只小鼠抗血清效價達到1:64000,另一只小鼠抗血清效價達到1:32000。此外,用Western blot檢驗其特異性,結(jié)果表明,多克隆抗體特異性較好。
【圖文】：

門氏菌菌毛蛋白 FimA 特異性適配體及多克隆抗體的制備第一章 引言和文獻綜述門氏菌氏菌（S. typhimurium）是一種人畜共患病腸道致病。它在自然界中分布廣泛，在全球范圍內(nèi)均有其蹤強，傳播迅速，主要通過水和食物等途徑進行傳播生條件差，由 S. typhimurium 引起的感染尤為嚴(yán)重，

圖 1-2 細菌菌毛原子力顯微鏡成像[21]Fig.1-2 Atomic force microscopy image of bacterial pi拷貝的主要亞單位蛋白和一些功能各異的低拷貝亞單位通過有序的合成組裝，最終形成具有一定對細菌與定植表面的黏附，，菌膜形成等均有重要murium 菌毛 S. typhimurium 菌毛研究比較多的為Ⅰ型菌毛能產(chǎn)生Ⅰ型菌毛，Ⅰ型菌毛是由 fim 基因決定簇編為重要，構(gòu)成菌毛的主體部分[25]，而 FimH 蛋白位附素蛋白[26]，另外 FimZ，F(xiàn)imW，F(xiàn)imD 等菌毛9]。正是由于各種菌毛蛋白亞基之間的精妙組裝與
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：Q93

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本文編號：2623250