【摘要】：無(wú)偶斗星介(Cypridopsisvidua)是介形類中為數(shù)不多的全球分布物種之一,它對(duì)各種環(huán)境因子均具有較強(qiáng)的耐受性。眾所周知,鹽度是水生生物分布的主要限制性因素。無(wú)偶斗星介作為淡水種,其可分布于鹽度為8‰左右的自然水體中,因此該物種成為研究水生動(dòng)物滲透壓調(diào)節(jié)的良好材料。本論文通過(guò)研究無(wú)偶斗星介三種滲透壓調(diào)節(jié)相關(guān)基因表達(dá)量對(duì)高鹽環(huán)境的響應(yīng),探討了小型甲殼動(dòng)物滲透壓調(diào)節(jié)基因應(yīng)對(duì)突發(fā)鹽度升高時(shí)的分子響應(yīng)機(jī)制。研究結(jié)果為深入了解廣布種水生動(dòng)物的適應(yīng)性分布提供了理論依據(jù)。本研究首次克隆獲得了參與無(wú)偶斗星介滲透壓調(diào)節(jié)的V-type H+-ATPase B亞基基因(命名為CvVHA-B)和Na+/K+/2Cl-共轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因(命名為CvNKCC),其中CvVHA-B基因的cDNA全長(zhǎng)為2178bp,編碼氨基酸498個(gè);CvNKCC基因的cDNA全長(zhǎng)為4001bp,編碼氨基酸1055個(gè)。兩條基因的分子系統(tǒng)學(xué)研究結(jié)果顯示無(wú)偶斗星介和其他“泛甲殼動(dòng)物”聚為一支,說(shuō)明CvVHA-B和CvNKCC基因在“泛甲殼動(dòng)物”的進(jìn)化中均具有保守性。在上述工作基礎(chǔ)上,本研究進(jìn)一步應(yīng)用改良后的整體原位雜交技術(shù),對(duì)CvVHA-B和CvNKCC基因mRNA的表達(dá)位置進(jìn)行了研究,初步確定無(wú)偶斗星介的內(nèi)殼層是滲透壓調(diào)節(jié)的主要功能部位。本研究的鹽度梯度實(shí)驗(yàn)(0、4、8、12、16和20‰)確定了無(wú)偶斗星介于室內(nèi)急性鹽度脅迫條件下24h內(nèi)可忍耐的高鹽度為8‰�；诖�,本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法探討了在4‰和8‰鹽度濃度條件下,Na+/K+-ATPaseα亞基基因(命名為CvNKA-α)、CvVHA-B和CvNKCC三種基因部分片段的mRNA表達(dá)量隨時(shí)間的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn):4‰鹽度條件下三種基因的表達(dá)量與對(duì)照組(0‰)間無(wú)明顯差別(P0.05);8‰鹽度條件下,三種基因表達(dá)量的變化表現(xiàn)出一定的時(shí)序性,即:CvNKA:α的表達(dá)量于3h時(shí)顯著下降(P0.05),隨即CvVHA-B于12h時(shí)顯著性下降(P0.05),而CvNKCC則于24h時(shí)呈現(xiàn)顯著性上升(P0.05)。結(jié)合三種基因在動(dòng)物鹽度滲透壓調(diào)節(jié)中的作用,本研究認(rèn)為:在面對(duì)突發(fā)的高鹽環(huán)境時(shí),該物種可采用下調(diào)CvNKA-α和CvVHA-B的表達(dá)量及上調(diào)CvNKCC的表達(dá)量的一種分子策略來(lái)加以適應(yīng)。這很好地解釋了淡水種無(wú)偶斗星介能夠分布于高達(dá)8‰的自然水體的原因。
【圖文】：

３．１總ＲＮＡ的提取逡逑利用Ｔｒｉｚｏｌ法提取得到的無(wú)偶斗星介整體的總ＲＮＡ，經(jīng)過(guò)ＤＮａｓｅ酶處理后的逡逑瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果（圖２－１）顯示出清晰的２８Ｓ和１８Ｓ兩條條帶，并且１８Ｓ條帶逡逑的亮度明顯亮于２８Ｓ條帶，但是沒(méi)有顯示出５Ｓ條帶。經(jīng)核酸蛋白檢測(cè)儀檢測(cè)后，逡逑顯示Ａ２６０／Ａ２８０值均處于１．８－２．０，這表明提取獲得的總ＲＮＡ樣品的完整性良好，逡逑所以本研究中仍采用該提取結(jié)果用作于后續(xù)的基因全長(zhǎng)序列的克隆。逡逑圖２－１無(wú)偶斗n漚檎逄崛〉淖埽遙危戀纈窘峁＃鄭海遙危僚芙撼曬椎潰唬停海模蹋玻埃埃埃模危鈴義希停幔潁耄澹蟈義希疲椋紓玻卞澹裕錚簦幔戾澹遙危鈴澹澹歟澹悖簦潁錚穡瑁錚潁澹螅椋簀澹潁澹螅酰歟簦簀澹錚駑澹簦瑁邋澹鰨瑁錚歟邋澹錚駑澹茫澹觶椋洌酰幔澹鄭哄澹櫻酰悖悖澹螅螅媯酰戾澹穡錚潁邋澹錚駑澹遙危鈴義希潁酰猓猓椋睿玨澹紓歟酰澹誨澹停哄澹模蹋玻埃埃板澹模危鈴澹停幔潁耄澹蟈義希常插位潁悖模危寥ば蛄屑捌浞治鰣義希常玻被虻娜ば蛄屑吧鐨畔⒀у義弦暈夼級(jí)沸墻椋茫模危廖０�，憳忝枷姠引五P校茫一竦昧艘惶酰矗福福猓鸕模錚潁恚義希禱虻暮誦鈉渦蛄屑暗纈窘峁ㄍ跡玻玻捎錳匾煨砸锿ü鄭遙粒茫藕停場(chǎng)義希遙粒茫爬┰黽捌唇櫻�，租偙K玫交潁悖模危寥ば蛄形玻保罰ュ澹ㄍ跡玻常義舷忠煙嶠唬牽澹睿攏幔睿�，编号为Ｍ｝x梗玻保矗叮�。ＣＳz品玻矗禱蛉ず塑賬嶁蛄屑八嗦氳膩義希玻卞義

本文編號(hào)：2608121