變性泡介導(dǎo)的鏈交換擴(kuò)增方法在豬肉摻假檢測(cè)及電場(chǎng)輔助核酸預(yù)處理中的應(yīng)用研究
發(fā)布時(shí)間:2024-02-15 04:54
牛肉和羊肉因其較高的蛋白質(zhì)含量和較低的脂肪含量,味道鮮美且營(yíng)養(yǎng)豐富,但是由于牛羊的飼養(yǎng)成本高等因素,使得牛羊肉的價(jià)格比較高。由于豬肉的顏色和質(zhì)地與羊肉或牛肉相似,因此被廣泛用作這兩種肉的替代品。未經(jīng)聲明在牛肉或羊肉中添加豬肉是欺詐行為,可能會(huì)嚴(yán)重威脅諸如穆斯林等消費(fèi)者的種族選擇或宗教習(xí)俗。隨著中國(guó)人民生活水平的提高和中國(guó)食品工業(yè)的現(xiàn)代化,導(dǎo)致動(dòng)物食品生產(chǎn)的需求和生產(chǎn)在不斷增加。同時(shí),為了追求更高的經(jīng)濟(jì)效益,食品制造商可能會(huì)用便宜的肉類(lèi)代替昂貴的羊肉或牛肉,例如可食用的豬肉,雞肉,鴨肉,馬肉和不可食用的老鼠肉,狐貍?cè)獾。隨著肉制品摻假問(wèn)題在全世界范圍內(nèi)變得日益突出,用簡(jiǎn)單的設(shè)備實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)的肉制品摻假檢測(cè)對(duì)于食品安全、宗教信仰等領(lǐng)域具有越來(lái)越重要的意義。目前已經(jīng)開(kāi)發(fā)出許多技術(shù)來(lái)鑒定其他肉類(lèi)中的豬肉來(lái)源,例如形態(tài)學(xué),光譜學(xué),化學(xué)技術(shù)和蛋白質(zhì)分析。這些方法的準(zhǔn)確性高度依賴(lài)于經(jīng)驗(yàn)和技能,并受復(fù)雜的食物基質(zhì)的影響,因此通常很難從幾種肉類(lèi)混合物中檢測(cè)出豬肉;诤怂岬姆肿蛹夹g(shù),由于DNA分子具有更高的穩(wěn)定性,對(duì)肉制品摻假檢測(cè)更有優(yōu)勢(shì),具有快速,高靈敏度和特異性的特點(diǎn)。然而,聚合酶鏈反應(yīng)中熱循環(huán)過(guò)程對(duì)實(shí)...
【文章頁(yè)數(shù)】:70 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
1.1 引言
1.2 肉制品中豬肉摻假的檢測(cè)方法
1.2.1 光譜法
1.2.1.1 紅外光譜法
1.2.1.2 拉曼光譜法
1.2.1.3 高光譜成像
1.2.1.4 激光誘導(dǎo)擊穿光譜
1.2.2 蛋白質(zhì)組學(xué)分析法
1.2.2.1 免疫分析法
1.2.2.2 MS技術(shù)
1.2.3 變溫核酸擴(kuò)增方法
1.2.4 等溫核酸擴(kuò)增方法
1.2.4.1 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增
1.2.4.2 依賴(lài)于解旋酶的等溫核酸擴(kuò)增
1.2.4.3 交叉引物等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)
1.2.4.4 重組酶聚合擴(kuò)增
1.2.4.5 滾環(huán)擴(kuò)增
1.2.4.6 指數(shù)等溫?cái)U(kuò)增
1.2.4.7 單引物引發(fā)的核酸擴(kuò)增反應(yīng)
1.2.4.8 基于變性泡介導(dǎo)的鏈交換擴(kuò)增
1.3 不同表征方法在豬肉核酸檢測(cè)中的應(yīng)用
1.4 本論文的研究意義與主要內(nèi)容
第二章 等溫核酸擴(kuò)增反應(yīng)對(duì)肉制品中豬肉摻假檢測(cè)的研究
2.1 引言
2.2 實(shí)驗(yàn)部分
2.2.1 儀器與試劑
2.2.2 動(dòng)物組織基因提取試劑盒法提取肉制品中的核酸
2.2.3 熱裂解法肉制品基因組DNA的提取
2.2.4 瓊脂糖凝膠電泳
2.2.5 聚丙烯酰胺凝膠電泳
2.3 結(jié)果討論
2.3.1 凝膠電泳方法對(duì)豬肉核酸提取效果的表征
2.3.2 基于變性泡介導(dǎo)的鏈交換擴(kuò)增反應(yīng)對(duì)豬肉摻假檢測(cè)的研究
2.3.2.1 SEA方法檢測(cè)豬源性成分特異性引物的溫度優(yōu)化實(shí)驗(yàn)
2.3.2.2 SEA方法對(duì)豬源性成分的可行性和特異性檢測(cè)
2.3.2.3 SEA方法對(duì)豬源性成分的靈敏度檢測(cè)
2.3.2.4 抗干擾檢測(cè)
2.3.2.5 快速提取與基于變性泡介導(dǎo)的鏈交換擴(kuò)增反應(yīng)聯(lián)用
2.3.2.6 SEA與其他檢測(cè)方法的比較
2.4 小結(jié)
第三章 快速電化學(xué)核酸提取技術(shù)的初步探究
3.1 引言
3.2 實(shí)驗(yàn)部分
3.2.1 儀器與試劑
3.2.2 裸金電極的制備
3.2.3 生物傳感器的組裝
3.2.4 電化學(xué)測(cè)量
3.2.5 電場(chǎng)輔助雜交和電場(chǎng)輔助洗脫
3.2.6 采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)對(duì)提取效果進(jìn)行驗(yàn)證
3.3 結(jié)果與討論
3.3.1 電場(chǎng)輔助雜交電壓條件優(yōu)化
3.3.2 電場(chǎng)輔助雜交時(shí)間條件優(yōu)化
3.3.3 洗脫電場(chǎng)條件優(yōu)化
3.3.4 復(fù)雜環(huán)境下電化學(xué)輔助雜交提取效果
3.4 小結(jié)
第四章 展望
4.1 基于變性泡介導(dǎo)的鏈交換擴(kuò)增技術(shù)研究展望
4.2 基于電場(chǎng)輔助雜交的核酸提取方法研究展望
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文目錄
本文編號(hào):3899241
【文章頁(yè)數(shù)】:70 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
1.1 引言
1.2 肉制品中豬肉摻假的檢測(cè)方法
1.2.1 光譜法
1.2.1.1 紅外光譜法
1.2.1.2 拉曼光譜法
1.2.1.3 高光譜成像
1.2.1.4 激光誘導(dǎo)擊穿光譜
1.2.2 蛋白質(zhì)組學(xué)分析法
1.2.2.1 免疫分析法
1.2.2.2 MS技術(shù)
1.2.3 變溫核酸擴(kuò)增方法
1.2.4 等溫核酸擴(kuò)增方法
1.2.4.1 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增
1.2.4.2 依賴(lài)于解旋酶的等溫核酸擴(kuò)增
1.2.4.3 交叉引物等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)
1.2.4.4 重組酶聚合擴(kuò)增
1.2.4.5 滾環(huán)擴(kuò)增
1.2.4.6 指數(shù)等溫?cái)U(kuò)增
1.2.4.7 單引物引發(fā)的核酸擴(kuò)增反應(yīng)
1.2.4.8 基于變性泡介導(dǎo)的鏈交換擴(kuò)增
1.3 不同表征方法在豬肉核酸檢測(cè)中的應(yīng)用
1.4 本論文的研究意義與主要內(nèi)容
第二章 等溫核酸擴(kuò)增反應(yīng)對(duì)肉制品中豬肉摻假檢測(cè)的研究
2.1 引言
2.2 實(shí)驗(yàn)部分
2.2.1 儀器與試劑
2.2.2 動(dòng)物組織基因提取試劑盒法提取肉制品中的核酸
2.2.3 熱裂解法肉制品基因組DNA的提取
2.2.4 瓊脂糖凝膠電泳
2.2.5 聚丙烯酰胺凝膠電泳
2.3 結(jié)果討論
2.3.1 凝膠電泳方法對(duì)豬肉核酸提取效果的表征
2.3.2 基于變性泡介導(dǎo)的鏈交換擴(kuò)增反應(yīng)對(duì)豬肉摻假檢測(cè)的研究
2.3.2.1 SEA方法檢測(cè)豬源性成分特異性引物的溫度優(yōu)化實(shí)驗(yàn)
2.3.2.2 SEA方法對(duì)豬源性成分的可行性和特異性檢測(cè)
2.3.2.3 SEA方法對(duì)豬源性成分的靈敏度檢測(cè)
2.3.2.4 抗干擾檢測(cè)
2.3.2.5 快速提取與基于變性泡介導(dǎo)的鏈交換擴(kuò)增反應(yīng)聯(lián)用
2.3.2.6 SEA與其他檢測(cè)方法的比較
2.4 小結(jié)
第三章 快速電化學(xué)核酸提取技術(shù)的初步探究
3.1 引言
3.2 實(shí)驗(yàn)部分
3.2.1 儀器與試劑
3.2.2 裸金電極的制備
3.2.3 生物傳感器的組裝
3.2.4 電化學(xué)測(cè)量
3.2.5 電場(chǎng)輔助雜交和電場(chǎng)輔助洗脫
3.2.6 采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)對(duì)提取效果進(jìn)行驗(yàn)證
3.3 結(jié)果與討論
3.3.1 電場(chǎng)輔助雜交電壓條件優(yōu)化
3.3.2 電場(chǎng)輔助雜交時(shí)間條件優(yōu)化
3.3.3 洗脫電場(chǎng)條件優(yōu)化
3.3.4 復(fù)雜環(huán)境下電化學(xué)輔助雜交提取效果
3.4 小結(jié)
第四章 展望
4.1 基于變性泡介導(dǎo)的鏈交換擴(kuò)增技術(shù)研究展望
4.2 基于電場(chǎng)輔助雜交的核酸提取方法研究展望
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號(hào):3899241
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