化學發(fā)光免疫分析是結(jié)合了高靈敏度的化學發(fā)光與高特異性的免疫反應(yīng)的微量分析技術(shù)�；瘜W發(fā)光酶免疫分析是利用辣根過氧化物酶標記抗原或抗體,在體系中加入魯米諾類物質(zhì)產(chǎn)生發(fā)光反應(yīng),因其特異性強、靈敏度高、可實現(xiàn)痕量檢測等特點,被廣泛應(yīng)用于基質(zhì)中農(nóng)藥殘留檢測。甲萘威是氨基甲酸酯類農(nóng)藥的典型代表,具有中等毒性,在環(huán)境和農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)過程中易于殘留,嚴重威脅人體健康。因此,發(fā)展和建立甲萘威的快速、高效化學發(fā)光免疫分析方法,不僅為氨基甲酸酯類農(nóng)藥的快速檢測提供技術(shù)支撐,更為其它農(nóng)藥的免疫檢測方法提供借鑒。本文主要的研究內(nèi)容如下:1、研究甲萘威化學發(fā)光HRP-Luminol-H₂O₂體系。選擇具有特異性吸附的HRP酶標記半抗原,進一步通過優(yōu)化和比較發(fā)光體系的靈敏度、穩(wěn)定性、檢測限,建立了一種靈敏度高、特異性好甲萘威殘留的直接競爭化學發(fā)光免疫分析方法。通過方陣法優(yōu)化RLUmax/IC₅₀值,確定直接競爭CLEIA法抗體和酶標半抗原的最適工作濃度。結(jié)果表明:在HRP-Luminol-H₂O₂體系中,甲萘威...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 前言
    1.1 氨基甲酸酯類農(nóng)藥
        1.1.1 甲萘威的簡介
        1.1.2 氨基甲酸酯類農(nóng)藥的簡介
            1.1.2.1 化合物的分子結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)
            1.1.2.2 氨基甲酸酯類農(nóng)藥的作用機理及危害
        1.1.3 氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢測技術(shù)
            1.1.3.1 色譜分析法
            1.1.3.2 酶抑制法
            1.1.3.3 免疫分析法
            1.1.3.4 生物傳感器分析法
    1.2 化學發(fā)光免疫分析
        1.2.1 化學發(fā)光免疫分析的原理
        1.2.2 化學發(fā)光免疫分析的類型
            1.2.2.1 直接化學發(fā)光免疫分析
            1.2.2.2 化學發(fā)光酶免疫分析
            1.2.2.3 電化學發(fā)光免疫分析
        1.2.3 化學發(fā)光免疫分析方法的比較
        1.2.4 化學發(fā)光免疫分析技術(shù)的應(yīng)用
            1.2.4.1 在食品安全方面的應(yīng)用
            1.2.4.2 在醫(yī)學臨床分析方面的應(yīng)用
            1.2.4.3 在環(huán)境方面的應(yīng)用
    1.3 研究意義及內(nèi)容
2 化學發(fā)光HRP-LUMINOL-H₂O₂ 體系的建立
    2.1 實驗材料與方法
        2.1.1 實驗儀器與試劑
        2.1.2 實驗方法
            2.1.2.1 配置緩沖溶液
            2.1.2.2 甲萘威半抗原的合成
            2.1.2.3 甲萘威人工抗原的合成
            2.1.2.4 甲萘威偶聯(lián)比的測定
            2.1.2.5 甲萘威抗體的制備
            2.1.2.6 抗體包被濃度及酶標半抗原濃度的確定
            2.1.2.7 CLEIA方法的建立步驟
            2.1.2.8 樣品前處理
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 甲萘威偶聯(lián)比的計算
        2.2.2 抗血清與包被原的結(jié)合效價的測定
        2.2.3 抗血清與包被原的結(jié)合效價的確定
        2.2.4 甲萘威抗體包被濃度及酶標半抗原稀釋濃度的確立
        2.2.5 建立CLEIA方法的標準曲線
        2.2.6 添加回收試驗
    2.3 本章小結(jié)
3 間接競爭CLEIA方法的建立
    3.1 實驗材料與方法
        3.1.1 實驗儀器與試劑
        3.1.2 實驗方法
            3.1.2.1 配置緩沖溶液
            3.1.2.2 甲萘威標準溶液的配置
            3.1.2.3 方法的建立
            3.1.2.4 條件優(yōu)化
            3.1.2.5 間接CLEIA競爭抑制曲線的建立
            3.1.2.6 樣品前處理
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 最佳抗原和抗體稀釋比
        3.2.2 甲醇最適濃度的確定
        3.2.3 確定酶標二抗的稀釋倍數(shù)
        3.2.4 CLEIA標準曲線的建立
        3.2.5 添加回收實驗
        3.2.6 方法比較
    3.3 本章小結(jié)
4 甲萘威CLEIA方法的確證
    4.1 實驗材料與設(shè)備
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 設(shè)備儀器
        4.1.3 實驗試劑
    4.2 實驗方法
        4.2.1 樣品處理
        4.2.2 樣品提取液的凈化
        4.2.3 色譜-質(zhì)譜條件
        4.2.4 配置標準溶液
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 選擇樣品提取及凈化條件
        4.3.2 優(yōu)化質(zhì)譜條件
        4.3.3 建立標準曲線
        4.3.4 添加回收率
    4.4 儀器方法確證
    4.5 本章小結(jié)
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
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本文編號：3856958