發(fā)布時(shí)間：2023-09-13 23:02

　　為了提高畜牧業(yè)生產(chǎn)水平,獸藥作為畜牧業(yè)的基礎(chǔ)物質(zhì),被大量的使用,同時(shí)也對(duì)人們的身體造成了巨大的危害。因此獸藥殘留問題已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)。獸藥殘留檢測(cè)目前最常用的方法是免疫分析法,對(duì)于免疫分析法來說最具關(guān)鍵的就是抗體,抗體的穩(wěn)定性對(duì)最終結(jié)果起著關(guān)鍵的作用,本論文利用基因工程技術(shù)成功獲得了氨芐青霉素的單鏈抗體,并在此基礎(chǔ)上建立了間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法,為氨芐青霉素殘留檢測(cè)提供一種經(jīng)濟(jì)、靈敏、快速的檢測(cè)方法。從氨芐青霉素抗體的雜交瘤細(xì)胞中提取總RNA,利用RT-PCR反轉(zhuǎn)錄技術(shù)合成第一鏈cDNA。以針對(duì)鼠源重鏈可變區(qū)(V_H)及輕鏈可變區(qū)(V_L)基因的特異性引物,擴(kuò)增獲得V_H基因和V_L基因片段,通過擴(kuò)增后,得到V_H基因片段大小為340 bp左右,擴(kuò)增的V_L基因片段大小為320 bp,采用重疊延伸PCR(SOE-PCR)的方法,用柔性多肽Linker接頭(Gly4Ser)₃將V_H基因和V_L基因拼接成...

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 前言
    1.1 氨芐青霉素簡(jiǎn)介
    1.2 氨芐青霉素殘留現(xiàn)狀及危害
    1.3 氨芐青青霉素的檢測(cè)方法
    1.4 單鏈抗體的制備及應(yīng)用
    1.5 酶聯(lián)免疫吸附法
    1.6 研究目的及意義
第二章 材料與方法
    2.1 材料
    2.2 方法
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 單鏈抗體的制備
    3.2 間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的建立
    3.3 氨芐青霉素間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法性能指標(biāo)的評(píng)價(jià)
第四章 討論
    4.1 LINKER的選擇
    4.2 SCFV的連接
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3846080