目前,霉菌毒素污染谷物食品和奶制品的現象較為普遍,黃曲霉毒素M1(AFM1)和赭曲霉毒素A(OTA)是奶及奶制品中常見的兩種霉菌毒素,玉米赤霉烯酮(ZEA)是玉米及其它谷物中污染最為嚴重的霉菌毒素,在奶及奶制品中也存在。當腸道作為抵抗外來有害物質的第一道防線時,腸道細胞會受到高濃度的霉菌毒素危害,從而造成腸功能損傷。肝臟屬于機體的主要免疫、解毒和消化器官,也會暴露于霉菌毒素,對機體健康產生負面影響。隨著人們生活方式的改變,奶及奶制品和谷物也成為家庭常見的食物,AFM1、OTA與ZEA在人體內的暴露風險不容忽視。因此,本文利用免疫熒光、透射電鏡、實時熒光定量PCR法以及間接酶聯免疫吸附試驗分析了AFM1、OTA和ZEA對腸上皮細胞Caco-2/HT29-MTX緊密連接蛋白定位和黏蛋白分泌的影響。同時,采用代謝組學方法研究了AFM1、OTA及其混合物對小鼠肝臟和HepG2細胞代謝的影響。主要結果如下:一,AFM1、OTA和ZEA處理Caco-2/HT29-MTX細胞后,會增強腸上皮細胞的通透性。霉菌毒素處理也會明顯改變緊密連接蛋白(TJ蛋白)的形態(tài),破壞TJ蛋白的結構�；旌厦咕舅貙︷さ鞍�...

【文章頁數】：64 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
碩士學位論文評閱人、答辯委員會簽名表
摘要
abstract
主要符號對照表
第一章 緒論
    1.1 AFM1、OTA和 ZEA的概述
        1.1.1 AFM1、OTA和 ZEA的理化性質
        1.1.2 AFM1、OTA和 ZEA的毒性及致病性
        1.1.3 AFM1、OTA 和 ZEA 的污染概況
    1.2 AFM1、OTA和 ZEA的腸道毒性研究進展
        1.2.1 腸道結構及其屏障功能
        1.2.2 AFM1、OTA和 ZEA對腸屏障功能的影響
    1.3 霉菌毒素的肝臟毒性研究進展
    1.4 代謝組學技術在肝臟毒理學中的應用
    1.5 本研究的目的及意義
    1.6 本研究的研究內容
第二章 AFM1、OTA和 ZEA對腸上皮細胞屏障功能和黏蛋白分泌的影響
    2.1 試驗試劑和材料
    2.2 試驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)和處理
        2.2.2 TEER值檢測
        2.2.3 示蹤劑滲透量測量試驗
        2.2.4 蛋白印跡分析
        2.2.5 免疫熒光分析
        2.2.6 透射電鏡觀察細胞形態(tài)
        2.2.7 黏蛋白基因表達的定量聚合酶鏈反應分析(qPCR)
        2.2.8 黏蛋白的間接酶聯免疫吸附試驗(ELISA)
        2.2.9 統(tǒng)計學分析
    2.3 結果與分析
        2.3.1 AFM1、OTA和 ZEA對腸上皮細胞TEER值的影響
        2.3.2 AFM1、OTA和 ZEA對腸上皮細胞通透性的影響
        2.3.3 AFM1、OTA和 ZEA對腸上皮細胞TJ蛋白定位的影響
        2.3.4 AFM1、OTA和 ZEA對腸上皮細胞TJ蛋白形態(tài)的影響
        2.3.5 AFM1、OTA和 ZEA對腸上皮細胞黏蛋白基因的影響
        2.3.6 AFM1、OTA和 ZEA對腸上皮細胞黏蛋白表達的影響
        2.3.7 TJ蛋白、細胞通透性、黏蛋白基因表達和分泌之間的相關性分析
    2.4 討論與小結
第三章 AFM1和OTA致肝臟毒性的代謝組學研究
    3.1 試驗材料和儀器
        3.1.1 試驗動物
        3.1.2 試驗試劑
        3.1.3 試驗儀器
    3.2 試驗方法
        3.2.1 小鼠灌胃實驗及樣品采集
        3.2.2 體增重及臟器指數測定
        3.2.3 血清生化指標檢測
        3.2.4 肝臟組織病理分析
        3.2.5 肝臟的代謝組學分析
    3.3 結果與分析
        3.3.1 單獨及聯合的AFM1、OTA對小鼠體重和肝臟指數的影響
        3.3.2 單獨及聯合的AFM1、OTA對小鼠血清生化指標的影響
        3.3.3 單獨及聯合的AFM1、OTA對小鼠肝臟組織學變化的影響
        3.3.4 AFM1和OTA作用后小鼠肝臟內代謝物譜多元統(tǒng)計分析
        3.3.5 AFM1和OTA作用后小鼠肝臟內差異代謝物熱圖分析
        3.3.6 AFM1和OTA作用后小鼠肝臟內代謝物整合代謝通路分析
        3.3.7 AFM1和OTA作用后小鼠肝臟內差異代謝物維恩分析
        3.3.8 AFM1和OTA作用后小鼠肝臟內顯著代謝物分析
    3.4 討論與小結
第四章 AFM1和OTA致 Hep G2 細胞毒性的代謝組學研究
    4.1 試驗試劑和材料
    4.2 試驗方法
        4.2.1 HepG2細胞的培養(yǎng)和處理
        4.2.2 CCK-8試驗
        4.2.3 細胞代謝組學分析
    4.3 結果與分析
        4.3.1 單獨及聯合的AFM1、OTA對 Hep G2 細胞活性的影響
        4.3.2 單獨及聯合的AFM1、OTA對 Hep G2 細胞內差異代謝物的影響
    4.4 討論與小結
第五章 主要結論
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：3837284