我國是農(nóng)業(yè)大國,農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全是保障國民健康和經(jīng)濟社會發(fā)展的前提。農(nóng)藥在防治蟲害,調(diào)節(jié)農(nóng)作物生長方面起著重要的作用,但是盲目使用農(nóng)藥會造成農(nóng)藥殘留超標(biāo)等問題,對人類健康和生態(tài)環(huán)境造成不可逆轉(zhuǎn)的危害。因此急需建立一種靈敏度高、準(zhǔn)確性好、可重復(fù)性強、操作性簡便的檢測方法來滿足現(xiàn)階段有機磷農(nóng)藥殘留檢測的需求,這對社會的發(fā)展、國民的健康具有重要意義。本研究是在生物條形碼免疫分析方法的基礎(chǔ)上,結(jié)合DNA/RNA雜交循環(huán)技術(shù)和核糖核酸酶H(RNase H)的特異性水解作用,實現(xiàn)對農(nóng)產(chǎn)品中有機磷農(nóng)藥殘留的檢測分析研究。由于農(nóng)藥小分子只有一個結(jié)合位點,傳統(tǒng)的“三明治”夾心免疫法無法實現(xiàn)對小分子的檢測,所以實驗采用間接競爭的方法實現(xiàn)對農(nóng)藥小分子殘留的定性和定量檢測,檢測過程分為免疫反應(yīng)階段和雜交水解反應(yīng),將檢測到的熒光信號間接轉(zhuǎn)換為農(nóng)藥殘留的濃度。研究的主要內(nèi)容如下:將三唑磷農(nóng)藥單克隆抗體和DNA單鏈標(biāo)記在膠體金納米顆粒表面,制備膠體金納米探針,并進(jìn)行表征。首先對免疫反應(yīng)的實驗條件進(jìn)行探索,對使用的磷酸鹽緩沖液工作濃度和pH值、探針和OVA-半抗原的稀釋倍數(shù)、甲醇的濃度進(jìn)行優(yōu)化;然后對雜交水解反應(yīng)的實...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 研究背景
        1.1.1 農(nóng)藥殘留及其危害
        1.1.2 有機磷農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)
    1.2 生物條形碼免疫分析方法
        1.2.1 生物條形碼免疫分析方法原理
        1.2.2 生物條形碼免疫分析方法的應(yīng)用
        1.2.3 膠體金納米粒子的研究進(jìn)展
        1.2.4 寡聚核苷酸鏈的信號放大作用
        1.2.5 基于DNA-RNA雜交的循環(huán)放大技術(shù)
    1.3 本課題研究目的與研究內(nèi)容
        1.3.1 本課題研究目的與意義
        1.3.2 本課題研究內(nèi)容
第二章 基于DNA/RNA雜交的農(nóng)產(chǎn)品中三唑磷殘留生物條形碼免疫分析方法研究
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 材料與儀器
        2.2.2 寡聚核苷酸膠體金探針的制備
        2.2.3 基于DNA/RNA雜交的三唑磷生物條形碼免疫分析方法的建立
        2.2.4 樣品處理
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 膠體金探針的表征
        2.3.2 免疫分析條件的優(yōu)化
        2.3.3 雜交反應(yīng)體系的優(yōu)化
        2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        2.3.5 基質(zhì)效應(yīng)
        2.3.6 添加回收實驗
        2.3.7 實際樣品的檢測
    2.4 本章小結(jié)
第三章 基于DNA/RNA雜交的農(nóng)產(chǎn)品中有機磷農(nóng)藥多殘留生物條形碼免疫分析方法研究
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 材料與儀器
        3.2.2 三種寡聚核苷酸膠體金探針的制備
        3.2.3 基于DNA/RNA雜交的有機磷農(nóng)藥多殘留生物條形碼免疫分析方法的建立
        3.2.4 添加回收實驗
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 熒光標(biāo)記物之間的交叉反應(yīng)
        3.3.2 三種有機磷農(nóng)藥抗體的優(yōu)化
        3.3.3 檢測體系的交叉反應(yīng)
        3.3.4 基于DNA/RNA雜交的農(nóng)產(chǎn)品中有機磷農(nóng)藥多殘留生物條形碼免疫分析方法的建立
        3.3.5 添加回收實驗
    3.4 本章小結(jié)
第四章 全文結(jié)論
    4.1 總結(jié)
    4.2 研究創(chuàng)新點
    4.3 研究展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷



本文編號：3820899